長座蟲草子實體成分及抗氧化活性的研究.pdf

1、蟲草類真菌常具有抗菌、抗病毒、抗腫瘤、抗病原、抗氧化、抗輻射、殺蟲、鈣離子拮抗及增強人體免疫能力等功能，它們在醫(yī)藥、農(nóng)業(yè)、食品工業(yè)及現(xiàn)代生物技術領域應用廣泛。近年來由于人類對自然環(huán)境的破壞和對野生蟲草資源的濫采亂挖，導致野生蟲草資源越來越少，因此人工培養(yǎng)特定蟲草子實體成為保護和利用這類生物資源的有效途徑。人工培育蟲草子實體除了在蟲草分類、遺傳育種等領域具有重要價值外，還可得到藥材和保健食品的原料，進而分離其有效活性成分。長座蟲草是寄生于

2、同翅目蟬若蟲上的一種重要的蟲生真菌，其無性型為長座被毛孢。目前關于長座蟲草及其無性型的研究報道很少。
　　 本文首先對長座被毛孢的搖瓶工藝進行了初步研究，結合本課題組的研究成果，人工大量培養(yǎng)長座蟲草子實體獲得成功，并對其中的清除自由基活性物質(zhì)進行了系統(tǒng)研究。研究內(nèi)容包括：試驗菌株篩選、液體菌種培養(yǎng)基篩選優(yōu)化、搖瓶種子最佳培養(yǎng)時間確定、人工子實體的培養(yǎng)、清除自由基組分的分離純化、子實體提取物抗氧化模型的活性研究、三種萃取物的核苷和

3、麥角甾醇的定量測定和物質(zhì)類別鑒定，結果如下。
　　 采用平板培養(yǎng)方式對4株菌株進行了篩選。結果表明：菌株RCEF3666在三種平板培養(yǎng)基中長勢均良好，菌落直徑大，培養(yǎng)14d菌落直徑最大，產(chǎn)孢能力也較好，且在預實驗中該菌株也培養(yǎng)出子實體，因此選擇RCEF3666為進一步研究的優(yōu)良菌株。
　　 對5種液體搖瓶培養(yǎng)基進行了篩選，結果表明：菌株RCEF3666在液體培養(yǎng)基Ⅴ中培養(yǎng)15d后菌絲干重達到最高值，菌球大小均勻、發(fā)酵液色

4、澤純正，生長最好，因此選用液體培養(yǎng)基Ⅴ為液體搖瓶培養(yǎng)基。
　　 在上述基礎上，對RCEF3666菌株的最佳搖瓶培養(yǎng)時間進行了研究。結果表明：種子液在培養(yǎng)5d左右開始生長，14d左右生長速率達到最大，24d菌絲體干重達到最高，繼續(xù)培養(yǎng)菌絲體干重則差異不顯著，故選擇最大生長速率時期的種子作為搖瓶種子，確定該液體搖瓶種子最佳培養(yǎng)時間為14d。
　　 將蟲草子實體用80％乙醇，按8倍子實體質(zhì)量的溶劑量提取3次、每次2h，得到蟲草

5、醇提物。將此提取物依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取得到蟲草萃取物。采用抗超氧自由基能力測試、抗DPPH自由基能力測試、測定Fe離子還原能力及對亞油酸脂質(zhì)過氧化體系中的抗氧化作用等4種方法，對蟲草醇提物及不同溶劑萃取物抗氧化能力進行評價，測試結果顯示正丁醇層具有較好的抗氧化能力。
　　 對長座蟲草子實體提取物各部位進行可能含有的化學成分類型選擇各類成分特有的化學反應，如顏色反應、沉淀反應、熒光性質(zhì)等作一般定性預試。選取14種不同

6、物質(zhì)類別鑒定方法對長座蟲草子實體提取物進行鑒定，發(fā)現(xiàn)石油醚層可能含有甾體或三萜、生物堿、內(nèi)酯，正丁醇層可能含有氨基酸、甾體或三萜、生物堿、內(nèi)酯，水層可能含有糖類或苷、生物堿、內(nèi)酯。
　　 通過HPLC法對活性部位進行了核苷和麥角甾醇的定量測定。發(fā)現(xiàn)水層的核苷含量要顯著高于石油醚層和正丁醇層，而麥角甾醇的含量則是在石油醚層中含量最高。正丁醇層中既含有核苷又含有麥角甾醇。正丁醇層具有較高活性說明其可能含有其他的活性成分，這需要進行進