ZBTB8A互作蛋白的篩選及ZBTB6基因信息的初步研究.pdf

1、ZBTB蛋白是C2H2型鋅指蛋白家族的重要成員，作為轉(zhuǎn)錄因子調(diào)節(jié)下游靶基因的轉(zhuǎn)錄活性，廣泛地參與基因的轉(zhuǎn)錄調(diào)控，細(xì)胞增殖、分化及凋亡等生命活動。本實驗室通過RT-PCR從胃癌細(xì)胞AGS cDNA中克隆到一個ZBTB家族成員——ZBTB8A(Zinc finger and BTB domain containing 8A)(NM_001040441)。目前還未見ZBTB8A功能研究的相關(guān)文獻(xiàn)報道。我室前期研究結(jié)果表明ZBTB8A定位于1p

2、35.1，含有1326bp開放閱讀框，編碼一個由441個氨基酸組成，分子量為50KD的蛋白。ZBTB8A蛋白N端含有一個BTB結(jié)構(gòu)域，C端含有兩個典型的C2H2型鋅指基序。同源性分析顯示該蛋白BTB結(jié)構(gòu)域和多個ZBTB家族成員的BTB結(jié)構(gòu)域是高度同源的。亞細(xì)胞定位分析顯示ZBTB8A定位于細(xì)胞核且呈斑點狀分布。
　　 蛋白質(zhì)間的相互作用存在于機體每個細(xì)胞的生命活動過程中，它們控制著大量的細(xì)胞活動事件，是生命活動的基礎(chǔ)，一切生命活

3、動幾乎都是通過蛋白質(zhì)之間的相互作用而實現(xiàn)的，對生命活動過程中蛋白相互作用的研究有助于揭示生命過程的許多本質(zhì)問題。我們采用酵母雙雜交技術(shù)從人胎腦cDNA文庫中篩選與ZBTB8A相互作用的蛋白質(zhì)，共篩選得到34種與ZBTB8A互作的新蛋白，并對其中一種蛋白質(zhì)SMARCB1（也稱為INI1和BAF47）與ZBTB8A的相互作用進(jìn)行了進(jìn)一步的驗證。
　　 我們成功地構(gòu)建了哺乳動物表達(dá)載體pCMV-Myc-SMARCB1、pCMV-GST

4、-ZBTB8A、pCMV-GST- ZBTB8A-BTB和pCMV-GST- ZBTB8A-ZNF,此些融合蛋白在293T細(xì)胞中均可有效表達(dá)。哺乳動物pull-down實驗表明ZBTB8A與SMARCB1在293T中有相互作用，而ZBTB8A的BTB結(jié)構(gòu)域和ZNF結(jié)構(gòu)域均不與SMARCB1相互作用，說明該相互作用依賴于ZBTB8A蛋白結(jié)構(gòu)的完整性。
　　 本實驗室在研究ZBTB8A的同時，也關(guān)注另一個ZBTB家族成員——ZBTB

5、6(Zinc finger and BTB containing domain 6)(ZBTB26，ZID)。通過構(gòu)建綠色熒光蛋白融合表達(dá)載體pEGFP-ZBTB6對其進(jìn)行亞細(xì)胞定位分析，結(jié)果顯示ZBTB6定位于細(xì)胞核，呈斑點狀分布。為鑒定ZBTB6蛋白BTB結(jié)構(gòu)域和鋅指結(jié)構(gòu)域?qū)ζ浼?xì)胞核定位的影響，構(gòu)建了一系列截短型ZBTB6與綠色熒光蛋白融合表達(dá)的重組質(zhì)粒進(jìn)行亞細(xì)胞定位分析。結(jié)果顯示鋅指結(jié)構(gòu)域?qū)BTB6蛋白的細(xì)胞核定位起關(guān)鍵性作用，