ITSN2與Eps8相互作用并促進(jìn)其降解.pdf

1、人Eps8(Epidermalgrowthfactorreceptorpathwaysubstrate8)蛋白是一類重要的信號(hào)分子。最初被鑒定為表皮生長(zhǎng)因子受體EGFR的重要激酶活性底物之一，后來(lái)發(fā)現(xiàn)Eps8也是受體酪氨酸激酶的活性底物。人的Eps8基因定位于第12條染色體上，編碼的蛋白有兩個(gè)亞型：P97(97KD)和P68(68KD)。研究表明，Eps8可以調(diào)節(jié)表皮生長(zhǎng)因子EGF依賴的小G蛋白R(shí)ac的活性進(jìn)而調(diào)控細(xì)胞骨架肌動(dòng)蛋白的構(gòu)建

2、和重排。Eps8還能調(diào)節(jié)Rab5的活性，參與受體介導(dǎo)的細(xì)胞內(nèi)吞作用并影響Ras和Rac之間的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)。此外Eps8還參與多種腫瘤細(xì)胞的增殖和侵襲，增強(qiáng)促有絲分裂信號(hào)的釋放從而導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞的惡變。
　　 本文中我們用酵母雙雜交的方法，以Eps8作為誘餌蛋白對(duì)人腦cDNA文庫(kù)進(jìn)行篩選，鑒定出了一個(gè)新的與Eps8相互作用的蛋白-ITSN2。我們克隆并表達(dá)了ITSN2基因，免疫共沉淀實(shí)驗(yàn)的結(jié)果證實(shí)了Eps8和ITSN2蛋白在體內(nèi)能夠結(jié)合

3、。同時(shí)發(fā)現(xiàn)無(wú)論是內(nèi)源的還是外源的Eps8和ITSN2蛋白都在細(xì)胞質(zhì)中有明顯的共定位。GSTpull-down實(shí)驗(yàn)證實(shí)了Eps8和ITSN2在體外能夠相互作用。此外，我們對(duì)Eps8蛋白和酵母雙雜交篩選出的ITSN2片段進(jìn)行了分段表達(dá)，進(jìn)一步證實(shí)了Eps8和ITSN2蛋白的相互作用區(qū)域，即Eps8的260-306位氨基酸區(qū)域和ITSN2的CC結(jié)構(gòu)域。這些結(jié)果清楚地表明Eps8和ITSN2蛋白在體外和體外都能相互作用。
　　 本文還初