萊菔素抗腫瘤活性評價及作用機制研究.pdf

1、目的：許多流行病學(xué)及體外體內(nèi)腫瘤相關(guān)研究已經(jīng)證實，十字花科植物中的天然代謝產(chǎn)物-異硫氰酸酯(isothiocyanates，ITCs)，尤其是萊菔硫烷(sulforaphane，SFA)，既能在腫瘤起始前預(yù)防腫瘤發(fā)生又能在腫瘤發(fā)生發(fā)展階段殺傷腫瘤。我們的前期研究成功從萊菔子中分離純化出一種萊菔硫烷的結(jié)構(gòu)類似物-萊菔素(sulforaphene，SFE)，并推測其具有和萊菔硫烷相似的抗癌活性。本研究選擇在中國人群中高發(fā)的食管鱗癌和乳腺癌為

2、研究對象，體外體內(nèi)試驗評價萊菔素的抗腫瘤活性，并試圖揭示萊菔素在這兩種腫瘤中的抗腫瘤作用機制。
　　方法：MTT法體外評價萊菔素的抗腫瘤活性，流式細胞術(shù)觀察萊菔素對細胞周期和細胞凋亡的影響。Western Blot法分析DNA損傷和細胞周期相關(guān)標(biāo)志物蛋白水平和磷酸化變化，利用基因芯片技術(shù)進行表達譜分析腫瘤細胞在萊菔素給藥前后基因表達水平的改變，熒光定量PCR驗證芯片結(jié)果。構(gòu)建基因過表達質(zhì)粒瞬時轉(zhuǎn)染腫瘤細胞研究基因表達對腫瘤的影響。

3、裸鼠成瘤試驗體內(nèi)評價萊菔素的抗乳腺癌活性。
　　結(jié)果：萊菔素體外能夠有效抑制食管鱗癌和乳腺癌細胞生長，48小時抑制食管鱗癌和乳腺癌細胞的IC50均在25μM以內(nèi)，與萊菔硫烷比較二者IC50無顯著差別。流式細胞術(shù)結(jié)果顯示，萊菔素可將人食管鱗癌細胞KYSE150和KYSE30阻滯在G2/M期，這可能與萊菔素誘導(dǎo)DNA損傷尤其是雙鏈損傷(DSB)有關(guān)，同時還發(fā)現(xiàn)細胞內(nèi)活性氧簇物質(zhì)(ROS)的積累也部分貢獻了萊菔素對KYSE細胞的抑制作用

4、。乳腺癌裸鼠成瘤試驗進一步顯示萊菔素能夠有效抑制乳腺癌移植瘤的生長，且表現(xiàn)出很小的毒性。基因表達譜分析發(fā)現(xiàn)EGR1基因在乳腺癌細胞中被萊菔素上調(diào)表達18倍，而且熒光定量PCR結(jié)果與芯片結(jié)果基本一致。在乳腺癌細胞內(nèi)上調(diào)EGR1基因表達能夠抑制乳腺癌細胞的生長。利用臨床數(shù)據(jù)進行生存曲線分析顯示EGR1高表達的乳腺癌病人生存期相對更長，預(yù)后更好(HR=0.76，p=3.5e×10-6)。結(jié)果提示EGR1基因應(yīng)該是萊菔素抑制乳腺癌細胞的一個重要