多重耐藥鮑曼不動(dòng)桿菌對(duì)替加環(huán)素耐藥機(jī)制及同源性研究.pdf

1、研究目的:
　　1.明確我院臨床分離的鮑曼不動(dòng)桿菌對(duì)替加環(huán)素的敏感性和對(duì)其他常用抗生素的耐藥現(xiàn)狀。
　　2.揭示鮑曼不動(dòng)桿菌對(duì)替加環(huán)素敏感性下降的可能機(jī)制。
　　3.了解我院臨床分離的鮑曼不動(dòng)桿菌的同源性情況。
　　研究方法:
　　收集我院2012年1月至2012年12月臨床分離的74株非重復(fù)鮑曼不動(dòng)桿菌，其中64株對(duì)替加環(huán)素不敏感（tigecycline non-susceptible A.baumann

2、ii，TNAB），10株對(duì)替加環(huán)素敏感（tigecycline susceptible A.baumannii，TSAB）。
　　1.應(yīng)用瓊脂稀釋法測(cè)定74株鮑曼不動(dòng)桿菌對(duì)18種常用抗生素的最小抑菌濃度（Minimal inhibitory concentration，MIC），應(yīng)用肉湯微量稀釋法測(cè)定74株鮑曼不動(dòng)桿菌對(duì)替加環(huán)素的MIC。
　　2.應(yīng)用PCR擴(kuò)增技術(shù)對(duì)主要外排泵基因(adeABC、adeIJK、adeFGH、

3、abeM、adeSR及adeDE)、tetX及tetX1基因進(jìn)行篩選。
　　3.應(yīng)用實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)(real-time PCR)技術(shù)測(cè)定adeB、adeJ、adeG和abeM基因的表達(dá)情況。
　　4.應(yīng)用外排泵抑制劑羰基氰氯苯腙(carbonyl cyanide3-chlorophenylhydrazone， CCCP)、苯丙氨酰-精氨酸-β-苯胺(phenyl-arginin-β-naphthylamide，PA

4、βN)、N-甲基吡咯烷酮[1-(1-naphthylmethyl)-piperazine，NMP]、利血平和維拉帕米對(duì)替加環(huán)素的外排泵進(jìn)行抑制試驗(yàn)。
　　5.應(yīng)用多位點(diǎn)序列分型（Multilocus sequence typing，MLST）技術(shù)和脈沖場(chǎng)凝膠電泳(Pulsed-field gel electrophoresis，PFGE)技術(shù)了解鮑曼不動(dòng)桿菌的分子流行病學(xué)情況。
　　6.對(duì)感染有多重耐藥鮑曼不動(dòng)桿菌的TNAB

5、和TSAB兩組患者基本情況進(jìn)行回顧性分析。
　　研究結(jié)果:
　　1.74株非重復(fù)菌均為多重耐藥鮑曼不動(dòng)桿菌，仍保持較高敏感性的抗生素為多粘菌素。
　　2.大部分菌株同時(shí)攜帶有adeABC、adeIJK、adeFGH和abeM外排泵基因，1株TSAB菌株同時(shí)攜帶有adeABC和adeDE基因，12株(18.8％) TNAB菌株攜帶有tetX1基因。
　　3.相比TSAB組菌株，TNAB組菌株的adeB、adeJ、

6、adeG和abeM基因的平均表達(dá)水平分別高了29、3、0.7和1倍。
　　4.外排泵抑制劑CCCP和PAβN可提高部分多重耐藥鮑曼不動(dòng)桿菌對(duì)替加環(huán)素的敏感性，維拉帕米可降低部分多重耐藥鮑曼不動(dòng)桿菌對(duì)替加環(huán)素的敏感性，利血平和NMP沒有明顯作用。
　　5.MLST技術(shù)將74株鮑曼不動(dòng)桿菌分成了18個(gè)序列型（Sequence type，ST），包括8個(gè)新的ST型，其中ST208和ST191是最主要的ST型，屬于克隆復(fù)合體(Clo

7、nalcomplex，CC)92。用PFGE技術(shù)分成了19個(gè)脈沖型。
　　6.TNAB組患者和TSAB組患者除了最后一個(gè)月使用的碳青霉烯類抗生素有明顯的差異外，其他各項(xiàng)基本情況無(wú)明顯差異。
　　研究結(jié)論:
　　1.目前我院臨床分離的鮑曼不動(dòng)桿菌多為多重耐藥株，因此，合理規(guī)范使用抗生素在我院是十分必要的。
　　2.鮑曼不動(dòng)桿菌能夠通過高表達(dá)的AdeABC外排泵系統(tǒng)降低對(duì)替加環(huán)素的敏感性，有必要監(jiān)測(cè)鮑曼不動(dòng)桿菌對(duì)替加