豨薟草提取液的質(zhì)量控制以及豨薟草提取液對(duì)MPP+誘導(dǎo)的PC12細(xì)胞凋亡的保護(hù)作用.pdf

1、豨薟草具有祛風(fēng)濕、利關(guān)節(jié)、解毒的功效，常用于風(fēng)濕痹痛、筋骨無力、腰膝酸軟、四肢麻痹、半身不遂、風(fēng)疹濕瘡等癥。其化學(xué)成分主要含萜和苷類等，其中奇壬醇、豨薟精醇、豨薟苷在免疫調(diào)節(jié)、抗炎抗風(fēng)濕、心血管系統(tǒng)、抗病原微生物、抗氧化及抗早孕方面有明顯活性。在國(guó)內(nèi)已有學(xué)者研究證明，豨薟草提取液能明顯保護(hù)腦缺血再灌注的大腦皮層神經(jīng)元損傷模型，其機(jī)制與豨薟草抗氧化作用有關(guān)。但是關(guān)于豨薟草提取液治療帕金森癥的物質(zhì)基礎(chǔ)和具體作用機(jī)制在國(guó)內(nèi)外尚未見報(bào)道。

2、>　　本課題建立了豨薟草的HPLC指紋圖譜共有模式，對(duì)不同產(chǎn)地，不同批次的藥材進(jìn)行了相似度比較，并結(jié)合定量測(cè)定結(jié)果對(duì)各批藥材進(jìn)行評(píng)價(jià)。采用正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)，以奇壬醇的提取率為考察指標(biāo)，考察提取溶媒及溶媒用量、提取時(shí)間、提取次數(shù)等4個(gè)因素對(duì)提取結(jié)果的影響，篩選了豨薟草的最佳提取工藝。同時(shí)，利用帕金森病的細(xì)胞模型，探討了豨薟草提取液對(duì)1-甲基-4-苯基吡啶離子(MPP+)誘導(dǎo)的PC12細(xì)胞損傷是否具有保護(hù)作用，并探討其作用機(jī)制。
　　第一

3、部分 豨薟草的高效液相色譜指紋圖譜研究
　　目的:建立豨薟草的HPLC指紋圖譜，得到對(duì)照?qǐng)D譜，與不同產(chǎn)地、不同批次豨薟草藥材的指紋圖譜相比較，并測(cè)定各批藥材中奇壬醇、豨薟苷、豨薟精醇的含量，為科學(xué)評(píng)價(jià)與有效控制豨薟草藥材質(zhì)量提供方法。
　　方法:色譜柱為Kromasil WQ C8柱（250mm×4.6mm，5μm），流動(dòng)相為甲醇-乙腈-0.05mol·L-1 KH2PO4溶液進(jìn)行梯度洗脫，柱溫30℃，檢測(cè)波長(zhǎng)為215nm，

4、流速1 mL·min-1。
　　結(jié)果:建立了豨薟草的HPLC指紋圖譜共有模式，對(duì)不同產(chǎn)地，不同批次的藥材進(jìn)行了相似度比較，并結(jié)合定量測(cè)定結(jié)果對(duì)各批藥材進(jìn)行評(píng)價(jià)。
　　結(jié)論:本方法操作簡(jiǎn)便、快速、準(zhǔn)確，為豨薟草藥材的鑒別和全面質(zhì)量控制提供了新的依據(jù)。
　　第二部分 正交法試驗(yàn)優(yōu)選豨薟草的提取工藝
　　目的:篩選豨薟草的最佳提取工藝。
　　方法:采用正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)，以奇壬醇的提取率為考察指標(biāo)，考察提取溶媒及溶媒用

5、量、提取時(shí)間、提取次數(shù)等4個(gè)因素對(duì)提取結(jié)果的影響。
　　結(jié)果:豨薟草最佳提取條件為加12倍量的80％乙醇，回流提取3次，每次提取40 min。
　　結(jié)論:本工藝重現(xiàn)性好，測(cè)定方法可行，為大批量豨薟草提取奇壬醇提供了理論依據(jù)。
　　第三部分 豨薟草提取液對(duì)MPP+誘導(dǎo)的PC12細(xì)胞凋亡的保護(hù)作用
　　目的:探討豨薟草提取液對(duì)1-甲基-4-苯基吡啶離子(MPP+)誘導(dǎo)的PC12細(xì)胞損傷是否具有保護(hù)作用，并探討其作用機(jī)

6、制。
　　方法:在生長(zhǎng)狀態(tài)良好的PC12細(xì)胞中加入終濃度為400μmol·L-1的MPP+，建立帕金森病的離體實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ停⒂^察豨薟草提取液對(duì)MPP+誘導(dǎo)的PC12細(xì)胞損傷的保護(hù)作用。倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)，MTT法檢測(cè)細(xì)胞活力，DCFH-DA熒光探針法檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)ROS水平。
　　結(jié)果:400μmol·L-1 MPP+作用PC12細(xì)胞，能明顯抑制細(xì)胞生長(zhǎng)，誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，升高活性氧水平。同時(shí)給予不同濃度豨薟草提取液，PC12細(xì)