基于MAPK信號通路的香葉木素抗腫瘤活性及機(jī)制研究.pdf

1、近年來我國惡性腫瘤發(fā)病率、死亡率呈持續(xù)增長趨勢，一方面可能是民眾健康普查重視程度不夠高，社會腫瘤防治宣傳相對薄弱，導(dǎo)致早期篩查診斷普及率低，大多數(shù)癌癥患者確診時已處于中晚期，治療效果相對較差，另一方面生態(tài)環(huán)境問題日益嚴(yán)峻，癌癥發(fā)病率居高不下與空氣污染、飲用水安全等問題密切相關(guān)。
　　香葉木素是天然黃酮類化合物的一種，具有抗腫瘤、抗炎、抗氧化以及保護(hù)中樞神經(jīng)系統(tǒng)等作用。本文將對香葉木素的體外和體內(nèi)抗腫瘤活性進(jìn)行研究，并探討其可能的作

2、用機(jī)制。
　　目的：觀察香葉木素在體外對五種人源腫瘤細(xì)胞株生長的抑制作用，并進(jìn)一步探究其對篩選出的最敏感瘤株人乳腺癌細(xì)胞 MCF-7生長抑制的作用機(jī)制；其次研究香葉木素對H22腹水瘤小鼠和H22實(shí)體瘤小鼠的影響，評價(jià)其體內(nèi)藥效。
　　方法：采用MTT法檢測不同濃度香葉木素對人乳腺癌細(xì)胞 MCF-7、人肝癌細(xì)胞 HepG2、人胃癌細(xì)胞 MGC-803、人前列腺癌細(xì)胞 PC3和人卵巢癌細(xì)胞 SK-OV-3的增殖抑制作用；倒置顯微

3、鏡觀察香葉木素作用前后MCF-7細(xì)胞的形態(tài)學(xué)變化；Annexin V-FITC/PI雙染法結(jié)合流式細(xì)胞儀檢測香葉木素誘導(dǎo)MCF-7細(xì)胞凋亡的凋亡率；PI染色法結(jié)合流式細(xì)胞儀檢測香葉木素對MCF-7細(xì)胞周期的影響；JC-1染色法結(jié)合流式細(xì)胞儀檢測香葉木素對MCF-7細(xì)胞線粒體膜電位的影響；利用Western Blotting方法檢測香葉木素作用于MCF-7細(xì)胞后MAPK家族蛋白表達(dá)情況；昆明小鼠腋下接種H22腹水瘤細(xì)胞懸液制備實(shí)體瘤小鼠模

4、型，造模成功的小鼠隨機(jī)分為模型組、陽性藥組、香葉木素低劑量組、香葉木素中劑量組和香葉木素高劑量組共5個組，分別觀察香葉木素對實(shí)體瘤小鼠胸腺指數(shù)、脾指數(shù)和瘤重的影響；昆明小鼠腹腔內(nèi)注射H22腹水瘤細(xì)胞懸液制備腹水瘤小鼠模型，造模成功的小鼠隨機(jī)分為4組，分別為模型組、陽性藥組、香葉木素中劑量組和香葉木素高劑量組，另設(shè)正常組。每隔一天測量小鼠的體質(zhì)重，并觀察其日常生活狀態(tài)，藥物治療結(jié)束后，檢測小鼠血清中ALT，AST水平，并統(tǒng)計(jì)各組小鼠的生存

5、期。
　　結(jié)果：（1）MTT實(shí)驗(yàn)結(jié)果：香葉木素對MCF-7，MGC-803，PC3，HepG2和SK-OV-3五種細(xì)胞株均有一定的抑制增殖作用，其中對前四種腫瘤細(xì)胞的IC50值分別為12.90±2.67μmol/L，30.94±2.26μmol/L，44.79±2.16μmol/L和31.32±1.84μmol/L，對SK-OV-3細(xì)胞的抑制作用較弱， IC50值大于100μmol/L。
　?。?）形態(tài)學(xué)變化：倒置顯微鏡觀察

6、香葉木素作用于MCF-7細(xì)胞后，與對照組相比，細(xì)胞增殖作用受到抑制，細(xì)胞數(shù)量明顯減少，且出現(xiàn)細(xì)胞皺縮、細(xì)胞碎片增加等現(xiàn)象。
　　（3）細(xì)胞凋亡率：香葉木素可引起MCF-7細(xì)胞凋亡，且隨著香葉木素作用濃度增加，細(xì)胞凋亡率呈上升趨勢。
　?。?）細(xì)胞周期：香葉木素可誘導(dǎo)MCF-7細(xì)胞發(fā)生G2/M期阻滯，且阻滯程度呈時間相關(guān)性，被阻滯在G2/M期的細(xì)胞比例最高可達(dá)62.1％。
　　（5）線粒體膜電位：香葉木素可誘導(dǎo)MCF-7

7、細(xì)胞線粒體膜電位下降，線粒體損傷，且線粒體膜電位下降情況呈時間相關(guān)性。
　　（6）Western Blotting實(shí)驗(yàn)結(jié)果：與對照組相比，香葉木素作用于MCF-7細(xì)胞后，隨作用時間和作用濃度的增加，p38和JNK信號通路被激活，磷酸化p38和磷酸化JNK的表達(dá)量增加，而磷酸化ERK的表達(dá)量沒有明顯變化。
　?。?）H22實(shí)體瘤實(shí)驗(yàn)：香葉木素對H22實(shí)體瘤有一定的抑制作用，低、中、高劑量組對H22實(shí)體瘤的抑制率分別為38.3%

8、，45.9%和49.6%。香葉木素抑制腫瘤的同時對小鼠的免疫系統(tǒng)也有一定的抑制，但副作用小于陽性藥。
　　（8）H22腹水瘤實(shí)驗(yàn)：與模型組相比，香葉木素能延長腹水瘤小鼠的生存期，中、高劑量組生命延長率分別35.26%和16.03%。另外，香葉木素對H22腹水瘤造成的小鼠肝臟損傷有一定的緩解作用。
　　結(jié)論：香葉木素在體內(nèi)和體外均具有抗腫瘤活性，體外細(xì)胞實(shí)驗(yàn)表明香葉木素在體外對多種腫瘤細(xì)胞增殖都具有抑制作用，其中抑制MCF-7