版權(quán)說明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內(nèi)容提供方,若內(nèi)容存在侵權(quán),請進(jìn)行舉報(bào)或認(rèn)領(lǐng)
文檔簡介
1、B細(xì)胞連接蛋白(BLNK)是在脊椎動物B淋巴細(xì)胞和巨噬細(xì)胞中廣泛表達(dá)的一類蛋白質(zhì),在進(jìn)化上高度保守,參與調(diào)節(jié)B淋巴細(xì)胞內(nèi)信號傳導(dǎo)、增殖、分化、凋亡等進(jìn)程,對于生物體維持正常生命活動起關(guān)鍵作用。七鰓鰻作為無頜類脊椎動物的代表,擁有著最古老的適應(yīng)性免疫防御機(jī)制。對無頜類脊椎動物的研究將為適應(yīng)性的免疫起源奠定堅(jiān)實(shí)的理論基礎(chǔ)。目前關(guān)于BLNK的研究多集中在哺乳動物,在七鰓鰻中是否存在BLNK尚不明確。本論文利用分子生物學(xué)手段和生物信息學(xué)方法,從
2、現(xiàn)存最古老的無頜類脊椎動物七鰓鰻(Lampetra japonica)血液cDNA文庫中搜索到一條BLNK同系物,對其基因進(jìn)行克隆和表達(dá)分析,有助于從分子水平上闡述脊椎動物BLNK蛋白的起源和進(jìn)化關(guān)系。
本研究通過對日本七鰓鰻血液cDNA文庫3382條有效EST序列進(jìn)行生物信息學(xué)分析,發(fā)現(xiàn)一條能夠翻譯BLNK保守區(qū)SH2結(jié)構(gòu)的核苷酸序列,長594 bp。通過RACE的實(shí)驗(yàn)方法從日本七鰓鰻白細(xì)胞中成功擴(kuò)增BLNK cDNA全
3、長并將保守區(qū)克隆到pET32a(+)載體。從一級結(jié)構(gòu)比對、高級結(jié)構(gòu)預(yù)測、保守基序的分布、等方面分析了這段序列。七鰓鰻BLNK不含有信號肽和跨膜區(qū)。為了進(jìn)一步說明七鰓鰻BLNK與其它脊椎動物BLNK的親緣關(guān)系,構(gòu)建基于鄰接法的系統(tǒng)發(fā)育樹,從進(jìn)化樹中發(fā)現(xiàn)脊椎動物BLNK基因大致分為兩三簇,哺乳動物與鳥類、爬行類動物一簇,硬骨魚類在一簇,兩棲類與七鰓鰻在一簇。此外,對七鰓鰻BLNK進(jìn)化地位進(jìn)行分析,發(fā)現(xiàn)七鰓鰻BLNK進(jìn)化地位比較原始,符合生物
4、由低等到高等的客觀自然進(jìn)化規(guī)律。
利用基因工程手段,設(shè)計(jì)特異性引物,以GAPDH作為內(nèi)參基因,Real-time PCR法檢測BLNK基因在七鰓鰻心臟、肝臟、腎臟、鰓、腸和白細(xì)胞中的相對表達(dá)量,發(fā)現(xiàn)在BLNK在七鰓鰻上述組織中廣泛表達(dá),進(jìn)一步經(jīng)脂多糖(LPS)與植物凝集素(PHA)刺激后,BLNK在白細(xì)胞與心臟中的表達(dá)量明顯上調(diào),具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。以上結(jié)果說明BLNK參與類B淋巴細(xì)胞免疫應(yīng)答,抵御外來物質(zhì)的入侵發(fā)揮著重大作用
5、。
進(jìn)一步構(gòu)建pET32a-BLNK原核表達(dá)載體,并在E.coli BL21中進(jìn)行表達(dá),組氨酸親和層析,獲取七鰓鰻BLNK重組蛋白(recombinant L.japonica BLNK,rLj—BLNK)純品。以純化的重組蛋白為抗原免疫新西蘭兔和BALB/c小鼠,制備兔抗七鰓鰻血清BLNK蛋白多克隆抗體和鼠抗七鰓鰻血清BLNK蛋白多克隆抗體。
綜合上述的研究結(jié)果得出:在最原始的脊椎動物七鰓鰻中存在B細(xì)胞連接
溫馨提示
- 1. 本站所有資源如無特殊說明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請下載最新的WinRAR軟件解壓。
- 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請聯(lián)系上傳者。文件的所有權(quán)益歸上傳用戶所有。
- 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網(wǎng)頁內(nèi)容里面會有圖紙預(yù)覽,若沒有圖紙預(yù)覽就沒有圖紙。
- 4. 未經(jīng)權(quán)益所有人同意不得將文件中的內(nèi)容挪作商業(yè)或盈利用途。
- 5. 眾賞文庫僅提供信息存儲空間,僅對用戶上傳內(nèi)容的表現(xiàn)方式做保護(hù)處理,對用戶上傳分享的文檔內(nèi)容本身不做任何修改或編輯,并不能對任何下載內(nèi)容負(fù)責(zé)。
- 6. 下載文件中如有侵權(quán)或不適當(dāng)內(nèi)容,請與我們聯(lián)系,我們立即糾正。
- 7. 本站不保證下載資源的準(zhǔn)確性、安全性和完整性, 同時也不承擔(dān)用戶因使用這些下載資源對自己和他人造成任何形式的傷害或損失。
最新文檔
- 日本七鰓鰻中MHCⅡB基因的克隆、表達(dá)與生物信息學(xué)分析.pdf
- 18821.七鰓鰻lcklike的克隆表達(dá)及生物信息學(xué)分析
- 8058.七鰓鰻syk的克隆表達(dá)、生物信息學(xué)分析及相關(guān)免疫學(xué)研究
- 重組日本七鰓鰻TCTP的生物信息學(xué)分析,組織表達(dá)及活性初探.pdf
- 日本七鰓鰻IκB基因CDS區(qū)克隆,信息學(xué)分析及LPS作用后表達(dá)差異.pdf
- 日本七鰓鰻CD45基因克隆,信息學(xué)分析及抗原刺激后表達(dá)差異.pdf
- 貢氏假鰓鳉GDF11基因的克隆、表達(dá)和生物信息學(xué)分析.pdf
- 油桐油體蛋白等基因的克隆及生物信息學(xué)分析.pdf
- 26235.日本七鰓鰻非受體酪氨酸激酶btk的全長cdna克隆和生物信息學(xué)分析
- 23153.七鰓鰻中含lrr基序分子的生物信息學(xué)分析及vlr分子進(jìn)化起源分析
- 雞LIF、POUV基因克隆、生物信息學(xué)分析及原核表達(dá).pdf
- 葡萄ACS基因的電子克隆及生物信息學(xué)分析.pdf
- 胃癌相關(guān)新基因的克隆及生物信息學(xué)分析.pdf
- 細(xì)胞周期蛋白生物信息學(xué)分析.pdf
- 豬鐵代謝相關(guān)基因的克隆、生物信息學(xué)分析及表達(dá)分布.pdf
- 31001.斑馬魚干擾素γ基因克隆表達(dá)及生物信息學(xué)分析
- 大白菜BrTCP基因的克隆及生物信息學(xué)分析.pdf
- 擬南芥AtDPBF4基因克隆、生物信息學(xué)分析與表達(dá)研究.pdf
- 脂肪細(xì)胞分化關(guān)鍵基因LXRα的生物信息學(xué)分析及表達(dá)規(guī)律.pdf
- 甜菜硝酸還原酶基因克隆及生物信息學(xué)分析.pdf
評論
0/150
提交評論