干擾Rab27A基因?qū)ξ赴┘?xì)胞SGC7901生物學(xué)行為的影響.pdf

1、目的：失控性體外增殖、遷移和侵襲能力是腫瘤細(xì)胞的基本生物學(xué)特性，這與基因的異常表達(dá)有著密切的關(guān)系。前期的研究結(jié)果顯示，Rab27A基因在胃癌及癌旁正常組織中呈現(xiàn)差異性表達(dá)，并且其表達(dá)水平與患者臨床病理學(xué)特征及預(yù)后有明確的相關(guān)性。這就提示Rab27A基因很可能在胃癌發(fā)生發(fā)展過程中發(fā)揮重要作用。但是，Rab27A基因?qū)ξ赴┘?xì)胞惡性生物學(xué)特性的影響還有待深入研究。目的：研究干擾Rab27A基因?qū)ξ赴┘?xì)胞增殖、遷移和侵襲能力的影響。
　　

2、方法：應(yīng)用Western Blot技術(shù)驗(yàn)證Rab27A基因在8對胃癌及癌旁組織中的差異性表達(dá)。采用RT-PCR和Western Blot技術(shù)檢測5個(gè)胃癌細(xì)胞系及1個(gè)永生化細(xì)胞系中Rab27A基因的表達(dá)水平，并從中篩選Rab27A高表達(dá)細(xì)胞株；以高表達(dá)Rab27A基因的SGC7901細(xì)胞為研究模型，通過細(xì)胞轉(zhuǎn)染，G418篩選，獲得候選RNA干擾穩(wěn)定細(xì)胞株，并通過RT-PCR，Western blot及免疫熒光標(biāo)記等技術(shù)進(jìn)行驗(yàn)證；再經(jīng)過MT

3、T實(shí)驗(yàn)、平板克隆形成實(shí)驗(yàn)、軟瓊脂集落形成實(shí)驗(yàn)和Transwell實(shí)驗(yàn)觀察干擾Rab27A后SGC7901細(xì)胞增殖，遷移及侵襲等生物學(xué)行為的改變。
　　結(jié)果：實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，與癌旁正常組織相比，Rab27A基因在胃癌組織中呈現(xiàn)低表達(dá)（7/8，87.5％）；在5個(gè)胃癌細(xì)胞系和1個(gè)永生化細(xì)胞系中Rab27A基因呈現(xiàn)差異性表達(dá)。選擇高表達(dá)Rab27A基因的SGC7901細(xì)胞為研究模型，轉(zhuǎn)染RNAi-2/3干擾質(zhì)粒抑制SGC7901細(xì)胞中Ra

4、b27A mRNA和蛋白的表達(dá)。Rab27A干擾穩(wěn)定細(xì)胞株干擾效率鑒定結(jié)果：與Vector相比，RNAi-2/3表達(dá)量明顯下降。MTT實(shí)驗(yàn)、平板克隆形成實(shí)驗(yàn)和軟瓊脂集落形成實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，干擾Rab27A對胃癌細(xì)胞SGC7901的細(xì)胞生長曲線、克隆形成數(shù)量及克隆形成大小沒有顯著影響（P>0.05）。Transwell實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，干擾Rab27A表達(dá)后的細(xì)胞穿過基膜或基質(zhì)膠的數(shù)量明顯增多（P<0.05），細(xì)胞的遷移和侵襲能力顯著提高。

5、r>　　結(jié)論：綜上所述，Rab27A在5個(gè)胃癌細(xì)胞系及1個(gè)永生化細(xì)胞系中呈現(xiàn)差異性表達(dá)；Rab27A基因?qū)ξ赴┘?xì)胞的生物學(xué)特性有重要影響，其干擾后可以增強(qiáng)胃癌細(xì)胞的遷移和侵襲能力，卻不影響胃癌細(xì)胞的增殖能力。這也提示在胃癌中Rab27A很可能是一種抑癌基因，可以作為潛在的腫瘤預(yù)后標(biāo)記物，為今后的臨床診斷治療及預(yù)后提供重要的參考價(jià)值。至今為止，人們對于腫瘤的認(rèn)識非常有限，更多的基因、效應(yīng)因子、信號通路以及分子機(jī)制仍需被發(fā)現(xiàn)。這不僅可以提升