脂多糖介導的宮內感染對子代大鼠下丘腦-垂體-腎上腺軸發(fā)育調節(jié)的影響.pdf

1、目的：觀察脂多糖（lipopolysaccharide，LPS）介導的宮內感染對子代大鼠海馬鹽皮質激素受體（mineralocorticoid receptor，MR）、糖皮質激素受體（glucocorticoid receptor，GR）表達及下丘腦-垂體-腎上腺（hypothalamus-pituitary-adrenal，HPA）軸調節(jié)功能的影響，探究宮內感染致子代大鼠學習記憶損傷的機制，為防治宮內感染引起的以學習記憶功能障礙為基

2、礎的神經精神后遺癥提供依據。
　　方法：10周齡雌性SD大鼠30只，適應性飼養(yǎng)1周后，按雌雄1:1配對，將孕鼠隨機分為對照組（10只）和實驗組（20只）。于孕第10天時，實驗組孕鼠腹腔內注射LPS（66μg/kg）溶液，對照組孕鼠腹腔內注射相同體積的生理鹽水。于子代大鼠出生后第48天時對其進行如下實驗研究：（1）神經行為學檢測：每組隨機抽取20只子代大鼠，采用曠場實驗檢測子代大鼠對新環(huán)境的探索能力，采用Morris水迷宮實驗檢測子

3、代大鼠的空間學習記憶能力；（2）每組隨機抽取10只子代大鼠，經心臟灌注固定后取大腦，制作石蠟切片，采用蘇木素-伊紅（hematoxylin-eosin，HE）染色法觀察子代大鼠海馬組織的病理學改變；（3）每組隨機抽取10只子代大鼠，經心臟灌注固定后取大腦，制作冰凍切片，采用間接免疫熒光雙標法比較子代大鼠海馬區(qū)MR和GR表達情況；（4）每組隨機抽取10只子代大鼠，迅速斷頭后冰上取腦，剝離海馬，采用蛋白質印跡實驗（即western blot

4、ting）觀察子代大鼠海馬MR、GR表達量的變化；（5）每組隨機抽取20只子代大鼠，采用地塞米松抑制實驗研究宮內感染對子代大鼠HPA軸調節(jié)功能的影響。
　　結果：（1）神經行為學檢測結果示：曠場實驗，實驗組子代大鼠的水平移動格數及后肢站立次數均較正常對照組減少，差異有統(tǒng)計學意義（t=2.227，2.189，P均<0.05）；Morris水迷宮實驗，定位航行實驗中，對照組和實驗組子代大鼠的逃避潛伏期隨訓練天數的增加均呈逐漸縮短的趨勢

5、，兩組間總體差異具有統(tǒng)計學意義（F=15.487，P<0.01），且于第3天開始，實驗組的逃避潛伏期長于正常對照組，差異具有統(tǒng)計學意義（d1：F=13.995，P<0.01；d2：F=4.911，P<0.05；d3：F=13.232， P<0.01），空間探索實驗中，實驗組子代大鼠在目標象限停留的時間及穿越原平臺所在位置的次數均少于正常對照組，差異具有統(tǒng)計學意義（時間：t=4.575，P<0.01；次數：t=2.230，P<0.05）。

6、（2）HE染色結果示：正常對照組子代大鼠海馬各區(qū)神經元排列均勻整齊，細胞核呈圓形或橢圓形，核仁明顯，染色質均勻；實驗組子代大鼠海馬CA1區(qū)神經元排列雜亂，多處可見細胞核固縮、碎裂、溶解現象，CA3區(qū)神經元排列均勻整齊，細胞核呈圓形或橢圓形，核仁明顯，染色質均勻，DG區(qū)細胞排列稀疏、雜亂，部分細胞核固縮、溶解。（3）免疫熒光雙標結果示：實驗組和對照組子代大鼠海馬以上各區(qū)均有MR、GR表達，且均在CA1區(qū)表達較多；MR、GR在細胞核和細胞質

7、中均有表達，其中MR以細胞質為主，GR以細胞核為主；海馬CA1區(qū)，實驗組子代大鼠MR和GR的平均光密度值均較正常對照組減低，差異具有統(tǒng)計學意義（t=2.470，2.398，P均<0.05），而兩組間MR/GR比值無統(tǒng)計學差異；海馬CA3區(qū)，實驗組子代大鼠MR、GR平均光密度值及MR/GR比值與正常對照組均無統(tǒng)計學差異；海馬DG區(qū)，實驗組子代大鼠MR平均光密度值與正常對照組比較無統(tǒng)計學差異，實驗組GR平均光密度值較正常對照組增加，差異有統(tǒng)

8、計學意義（t=-3.720，P<0.01），實驗組MR/GR比值較正常對照組減低，差異有統(tǒng)計學意義（t=2.151，P<0.05）。（4）蛋白質印跡實驗結果示：實驗組MR相對表達量于海馬CA1區(qū)和CA3區(qū)均較正常對照組減低，差異有統(tǒng)計學意義（ CA1：t=7.561, P<0.01；CA3：t=3.092，P<0.05），于海馬DG區(qū)與對照組比較差異無統(tǒng)計學意義；實驗組GR相對表達量于CA1區(qū)較正常對照組減低，差異有統(tǒng)計學意義（t=7.

9、238， P<0.01），于海馬CA3區(qū)與對照組比較差異無統(tǒng)計學意義，于海馬DG區(qū)較對照組增加，差異有統(tǒng)計學意義（t=-6.470，P<0.01）。（5）地塞米松抑制實驗結果示：子代大鼠腹腔內注射生理鹽水后的血清皮質酮水平（視為基礎血清皮質酮水平）及注射地塞米松后的血清皮質酮水平，實驗組與對照組均無統(tǒng)計學差異；實驗組子代大鼠腹腔內注射地塞米松后的血清皮質酮水平較應用生理鹽水的血清皮質酮水平減低，差異有統(tǒng)計學意義（t=8.092，P<0.

10、01），對照組的亦減低，差異有統(tǒng)計學意義（t=13.343，P<0.01），說明地塞米松對實驗組和對照組子代大鼠的HPA軸均產生抑制作用，兩組子代大鼠的HPA軸功能正常。
　　結論：LPS介導的宮內感染可引起子代對新環(huán)境的探索能力減退、空間學習記憶能力受損；其海馬各區(qū)病理學改變程度不一，于CA1區(qū)最為嚴重，其次為DG區(qū)，CA3區(qū)未見明顯異常；MR于海馬CA1、CA3區(qū)較正常對照組表達減少，GR于CA1區(qū)表達量較正常對照組減少，而于