Akt抑制劑聯(lián)合利妥昔單抗靶向治療伯基特淋巴瘤的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：探討Akt抑制劑（AZD5363）聯(lián)合利妥昔單抗在體外對(duì)伯基特淋巴瘤（Burkitt lymphoma，BL）增殖和凋亡的影響，并對(duì)相關(guān)的機(jī)制進(jìn)行探討，為臨床采用利妥昔單抗聯(lián)合Akt抑制劑靶向治療BL提供理論依據(jù)。
　　方法：
　　1.體外培養(yǎng)人Daudi細(xì)胞,采用CCK8法檢測(cè)不同濃度AZD5363、利妥昔單抗作用24h對(duì)Daudi細(xì)胞增殖的影響。
　　2.選取AZD536340μmol/L及利妥昔單抗50μg

2、/mL做進(jìn)一步研究,實(shí)驗(yàn)分4組:陰性組、AZD5363組、利妥昔單抗組、聯(lián)合用藥組(AZD5363+利妥昔單抗)，CCK8法檢測(cè)24、48、72小時(shí)后Daudi細(xì)胞的增殖情況及流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)48、72小時(shí)后Daudi細(xì)胞的凋亡情況。
　　3.選取AZD536340μmol/L及利妥昔單抗50μg/mL做進(jìn)一步研究,實(shí)驗(yàn)分4組:陰性組、AZD5363組、利妥昔單抗組、聯(lián)合用藥組(AZD5363+利妥昔單抗)，Western blot

3、（WB）方法檢測(cè)24h后Daudi細(xì)胞磷酸化Akt（phosphorate-Akt，p-Akt)和總Akt(total—Akt，T-Akt)蛋白的表達(dá)情況。
　　4.用SPSS19.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。
　　結(jié)果：
　　1、濃度為25、50、75、100ug/mL的利妥昔單抗作用于Daudi細(xì)胞24h后對(duì)應(yīng)的抑制率分別為16.35％、18.15%、21.89、24.36%，顯示利妥昔單抗在體外對(duì)Daudi細(xì)胞表現(xiàn)出較弱

4、的增殖抑制作用。
　　2、濃度為5、10、20、40及80μmol/L的AZD5363作用于Daudi細(xì)胞24h后對(duì)應(yīng)的抑制率分別為5.61%、13.42%、18.02%、21.32%、55.23%，在一定的濃度范圍內(nèi)，隨著AZD5363的濃度加大，其抑制率增加。
　　3、聯(lián)合用藥組在24、48、72h時(shí)間點(diǎn)對(duì)Daudi細(xì)胞增殖抑制率分別為35.13%、44.73%、71.33%，顯著高于AZD5363組及利妥昔單抗組，差異

5、均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p<0.05）。
　　4、聯(lián)合作用組作用于Daudi細(xì)胞48小時(shí)后凋亡率為47.21%，顯著高于AZD5363組（29.17%）及利妥昔單抗組（19.96%）；聯(lián)合作用組作用于Da udi細(xì)胞72小時(shí)后凋亡率為65.23%，顯著高于AZD5363組（40.70%）及利妥昔單抗組（22.61%），差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p<0.05）。
　　5、AZD5363組、利妥昔單抗組及聯(lián)合用藥組Daudi細(xì)胞T-Akt

6、表達(dá)無顯著的差異（p>0.05）；聯(lián)合用藥組Daudi細(xì)胞p-Akt表達(dá)明顯下調(diào)（0.18±0.04），并顯著低于AZD5363組（0.33±0.03）及利妥昔單抗組（0.45±0.04），差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p<0.05）。
　　結(jié)論：利妥昔單抗對(duì)BL細(xì)胞的增殖和凋亡影響較弱；Akt抑制劑AZD5363具有較強(qiáng)的抑制BL細(xì)胞增殖、促使細(xì)胞凋亡的作用，當(dāng)其與利妥昔單抗聯(lián)合應(yīng)用后，療效優(yōu)于單藥；其作用機(jī)制與Akt蛋白磷酸化水平下調(diào)