細(xì)胞核肌動蛋白參與基因轉(zhuǎn)錄調(diào)控的分子機(jī)制研究.pdf

1、肌動蛋白是一類高度保守的蛋白質(zhì)，存在于所有的真核細(xì)胞中，參與細(xì)胞分裂、運(yùn)動、遷移、形態(tài)的維持、生長等許多重要生理活動。有研究指出，肌動蛋白也存在于細(xì)胞核內(nèi)。但由于肌動蛋白是豐富的胞質(zhì)蛋白，致使這一結(jié)論受到質(zhì)疑。后來，依賴生物化學(xué)、免疫熒光、免疫電子顯微鏡和激光共聚焦顯微鏡等實(shí)驗(yàn)技術(shù)，證明肌動蛋白普遍存在于各類細(xì)胞的細(xì)胞核中。 雖然肌動蛋白在細(xì)胞質(zhì)中的功能已經(jīng)被研究的很透徹，但它在細(xì)胞核內(nèi)的功能還不清楚。有實(shí)驗(yàn)指出，肌動蛋白在核

2、運(yùn)輸方面發(fā)揮作用，可能參與RNA運(yùn)輸及mRNA加工。肌動蛋白還能與protein4．1共定位，可能參與核組裝過程。此外，肌動蛋白還能與染色質(zhì)改構(gòu)復(fù)合物和乙酰轉(zhuǎn)移酶復(fù)合物相互作用，在染色質(zhì)結(jié)構(gòu)的調(diào)整方面也發(fā)揮重要作用。越來越多的證據(jù)表明肌動蛋白也能參與基因轉(zhuǎn)錄的調(diào)控。在早期的實(shí)驗(yàn)中，微注射肌動蛋白的抗體或結(jié)合蛋白能抑制燈刷染色體的轉(zhuǎn)錄。肌動蛋白還能與RNA聚合酶Ⅱ共純化，對RNA聚合酶Ⅱ體外的有效轉(zhuǎn)錄起到作用。最近有實(shí)驗(yàn)指出，肌動蛋白能被

3、募集到基因的啟動子區(qū)，是轉(zhuǎn)錄前起始復(fù)合物的成分。但肌動蛋白在此復(fù)合物中的作用還有待于進(jìn)一步研究。 本文通過實(shí)驗(yàn)證明，RNA解旋酶A是轉(zhuǎn)錄前起始復(fù)合物中能夠與肌動蛋白相互作用的蛋白質(zhì)。我們首先通過免疫共沉淀和免疫熒光標(biāo)記技術(shù)證明RNA解旋酶A在體內(nèi)可以與肌動蛋白相互作用。然后利用GST pull—down實(shí)驗(yàn)證實(shí)RNA解旋酶A主要是通過其RGG區(qū)域與肌動蛋白作用，并且這一負(fù)顯性突變體能夠抑制RNA聚合酶Ⅱ募集到轉(zhuǎn)錄前起始復(fù)合物中