大鼠慢性壓迫性脊髓型頸椎病動(dòng)物模型的建立及評(píng)估.pdf

1、目的：
　　脊髓型頸椎病主要由頸椎椎間盤突出或者黃韌帶硬化，長(zhǎng)期壓迫脊髓，導(dǎo)致神經(jīng)功能障礙。脊髓型頸椎病發(fā)展過程、發(fā)病機(jī)制以及頸脊髓的病理生理變化目前尚不明確，由于人類活體脊髓標(biāo)本很難獲取，所以我們迫切需要建立動(dòng)物脊髓慢性壓迫模型用于對(duì)脊髓型頸椎病的研究。現(xiàn)有動(dòng)物模型的構(gòu)建方式，如螺釘擰入法、可控氣囊或球囊壓迫法等存在因反復(fù)操作致使感染率和死亡率較高以及壓迫強(qiáng)度非線性增加等問題，降低了其穩(wěn)定性、科學(xué)性及實(shí)用性；而植入膨脹物法因材料

2、的膨脹速度，其壓迫模型往往類似于亞急性壓迫模型。本實(shí)驗(yàn)旨在已有建模方式基礎(chǔ)上，建立更好模擬慢性發(fā)病的頸脊髓壓迫動(dòng)物模型。
　　方法：
　?。?）10只健康大鼠隨機(jī)均分為實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組。兩組動(dòng)物麻醉后在C5至C7水平切開皮膚及皮下肌肉組織，用咬骨鉗小心去除部分椎板，暴露硬脊膜。在實(shí)驗(yàn)組大鼠中將聚乙烯醇水凝膠置于大鼠C5-C6的椎板與硬脊膜之間。逐層止血縫合肌肉、筋膜、皮下和皮膚組織。術(shù)后大鼠清醒后,于籠中自由活動(dòng)。每天觀察大鼠

3、的行為及二便情況。于術(shù)后3周再次對(duì)兩組動(dòng)物行改良Rivlin斜板試驗(yàn)，并行磁共振檢查。將兩組大鼠過量麻醉處死，去受壓頸脊髓標(biāo)本作HE染色，觀察脊髓組織的鏡下變化。
　?。?）20只健康大鼠隨機(jī)分為直接壓迫組10只和薄膜包裹壓迫組10只，直接壓迫組大鼠在頸椎硬脊膜與椎板間植入裸露的聚乙烯醇水凝膠，方法同上；薄膜包裹壓迫組大鼠在頸椎硬脊膜與椎板間植入聚氨酯薄膜包裹造孔的聚乙烯醇水凝膠。手術(shù)前對(duì)兩組大鼠行BBB動(dòng)物行為學(xué)檢測(cè)，手術(shù)后每周

4、做一次BBB檢測(cè)，第三周BBB檢測(cè)后，將所有大鼠處死并取受壓部位脊髓標(biāo)本。每組中的隨機(jī)抽取五例標(biāo)本行TUNEL檢查凋亡細(xì)胞，另外5例行western blot檢測(cè)caspase-3凋亡蛋白。
　　結(jié)果：
　　（1）實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組大鼠術(shù)前改良Rivlin斜板試驗(yàn)中傾斜角度平均值相似，表明兩組大鼠術(shù)前脊髓功能狀態(tài)無顯著差異。術(shù)后第三周對(duì)照組大鼠改良Rivlin斜板試驗(yàn)傾斜角度平均為70.00°，實(shí)驗(yàn)組大鼠的平均傾斜角度為36.1

5、7°（P<0.05）,實(shí)驗(yàn)組大鼠術(shù)后的脊髓功能狀態(tài)明顯差于對(duì)照組大鼠。MRI下實(shí)驗(yàn)組可見T2信號(hào)增強(qiáng)，信號(hào)異常區(qū)彌散狀邊界不清，脊髓結(jié)構(gòu)紊亂；硬膜背側(cè)見局部滲出積液的高信號(hào)影。病理大體檢查見實(shí)驗(yàn)組大鼠頸脊髓組織較對(duì)照組損傷反應(yīng)明顯，可見血管扭曲變形、硬膜下出血點(diǎn)等；HE染色見對(duì)照組大鼠脊髓組織腫脹變形，有白質(zhì)脫髓鞘、膠質(zhì)細(xì)胞增生、灰質(zhì)內(nèi)神經(jīng)細(xì)胞腫脹崩解等損傷表現(xiàn)。
　?。?）BBB評(píng)分結(jié)果顯示，直接壓迫組大鼠運(yùn)動(dòng)功能在術(shù)后第一周即

6、迅速降低，后兩周繼續(xù)緩慢降低；薄膜包裹組第一周評(píng)分下降幅度較緩和，壓迫隨時(shí)間延長(zhǎng)，BBB評(píng)分持續(xù)下降。TUNEL法檢測(cè)脊髓組織中細(xì)胞凋亡情況結(jié)果表明，直接壓迫組標(biāo)本中的凋亡陽性細(xì)胞數(shù)目明顯多于薄膜包裹組標(biāo)本中的凋亡細(xì)胞數(shù)目。Western Blot蛋白電泳結(jié)果也可見直接壓迫組與薄膜包裹組相比凋亡蛋白Caspase-3表達(dá)量更多。
　　結(jié)論：
　　聚乙烯醇水凝膠植入法是一個(gè)較為理想的脊髓壓迫動(dòng)物模型的建立方法。術(shù)后改良Rivl