單環(huán)刺螠纖溶酶UFEⅠ的分離純化和性質(zhì)研究.pdf

1、血栓性疾病是嚴重危害人類健康的常見多發(fā)病，心腦血管疾病中有很大比例本質(zhì)為血栓病，它主要危害心、腦、肺等的血管系統(tǒng)，造成成年人死亡或殘疾。在我國，每年有超過260萬人死于心腦血管疾病，每年需要進行溶栓治療的病人超過300萬人，并且，這類疾病的發(fā)病率曾逐年上升趨勢。 纖溶療法是治療血栓性疾病的主要手段之一，迄今溶栓藥物已發(fā)展了三代，但距理想的溶栓藥物尚有差距。尋找和開發(fā)新型溶栓劑仍是心腦血管疾病治療的重要內(nèi)容。鑒于海洋生物活性物質(zhì)

2、具有獨特的優(yōu)點，海洋生物日益成為新藥開發(fā)的珍貴資源。本實驗室經(jīng)多年研究，從海洋無脊椎動物單環(huán)刺螠中尋找和分離了一種新型纖溶酶。現(xiàn)將主要研究結(jié)果分述如下： 單環(huán)刺螠纖溶酶在單環(huán)刺螠體腔液及內(nèi)臟等組織內(nèi)含量豐富，經(jīng)優(yōu)化工藝可提取多種酶活力組分，很可能是一組同工酶。我們試用兩套工藝均能制得單環(huán)刺螠纖溶酶UFE Ⅰ，達電泳純，經(jīng)過提取分離純化工藝的酶純化倍數(shù)可達11－12倍，產(chǎn)品酶得率可達27.0－30.0％。 單環(huán)刺螠纖溶

3、酶經(jīng)Native-PAGE電泳分析，該酶純度已經(jīng)達到99％；經(jīng)SDS-PAGE和飛行質(zhì)譜測定其分子量約為23，800Da；糖含量測定表明，該酶不是一種糖蛋白。 單環(huán)刺螠纖溶酶，在45℃以下時酶活力穩(wěn)定，6h內(nèi)酶的活性基本保持不變；在10種不同pH(3、4、5、6、7、8、9、10、11)的緩沖液中于室溫下放置24h，酶活無明顯改變。 單環(huán)刺螠纖溶酶的最適反應(yīng)溫度為45℃，最適pH約為6.5。 Ag+離子對單

4、環(huán)刺螠纖溶酶有抑制作用，Mn2+和Mg2+離子對酶有活化作用。其他金屬離子。 以酪蛋白為底物，根據(jù)雙倒數(shù)作圖法(Lineweaver-Burk plot)求出的酶反應(yīng)的動力學常數(shù)為：Km=3.48×10-3mol·L-1， Vmax=1.20×10-2mol·L-1·min-1。 單環(huán)刺螠纖溶酶對纖維蛋白具有很高的親和性，不僅可以降解纖維蛋白，還具有較高的激酶活性，這使得該酶能夠激活纖溶酶原并使之轉(zhuǎn)化為纖溶酶，從而間