槲皮素調(diào)控p38MAPK信號通路促進大鼠急性脊髓損傷修復(fù)的研究.pdf

1、目的:通過使用黃酮類化合物槲皮素治療大鼠急性脊髓損傷(spinal cord injury，SCI)，驗證其治療效果，并探討其可能的作用機制。
　　方法:取128只成年健康雌性SD大鼠，隨機等分為對照組、干預(yù)組、治療組和假手術(shù)組。對照組、干預(yù)組及治療組大鼠使用自制脊髓損傷打擊器建模:常規(guī)麻醉并消毒，摘除T9-T11椎板后暴露相應(yīng)脊髓節(jié)段，采用10g×25mm致傷勢能對脊髓進行垂直打擊建模。治療組及干預(yù)組大鼠于術(shù)后1h給予腹腔注射槲

2、皮素(25μmol/kg，12h/次)，持續(xù)7日;干預(yù)組大鼠在注射槲皮素后立即在對側(cè)腹腔注射p38MAPK特異性激活劑anisomycin;假手術(shù)組大鼠僅行椎板切除術(shù)。對照組及假手術(shù)組大鼠術(shù)后予以與治療組等量、等頻率的生理鹽水腹腔注射。大鼠建模成功后按摩膀胱排尿3次/日，直到恢復(fù)反射性膀胱;術(shù)后7日內(nèi)所有大鼠行氨芐青霉素腹腔注射預(yù)防感染。術(shù)后1d、3d、7d、14d、21d及28d對各組大鼠進行BBB評分。術(shù)后3d、7d、14d及28d

3、時每組隨機取8只大鼠麻醉并行心臟灌注，灌注成功后切取長約1cm的脊髓組織，縱切為均勻的左右兩半，取其中一半保存于-80℃冰箱，以備行Western blot蛋白檢測，另一半組織在4％多聚甲醛中浸泡24h用于免疫組化或HE染色。術(shù)后28d對各組大鼠脊髓組織進行HE染色并在顯微鏡下觀察。術(shù)后3d、7d、14d及28d對各組大鼠脊髓組織的膠質(zhì)纖維酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein，GFAP)和神經(jīng)絲蛋白-

4、200(neurofilament protein-200,NF-200)進行免疫組化染色，顯微鏡下觀察，統(tǒng)計分析各組的陽性細胞數(shù)目。術(shù)后3d、7d、14d及28d對各組大鼠脊髓組織的p38MAPK、磷酸化p38MAPK(phosphorylation p38MAPK，p-p38MAPK)蛋白的表達情況進行Western blot檢測，術(shù)后28d對各組大鼠脊髓組織的GFAP和NF-200蛋白進行Western blot檢測。
　　

5、結(jié)果:術(shù)后7d、14d、21d及28d，治療組大鼠BBB評分顯著高于對照組與干預(yù)組（P＜0.05）。術(shù)后3d和7d各脊髓損傷組的p38MAPK磷酸化水平明顯高于假手術(shù)組(P＜0.05），治療組的磷酸化水平在術(shù)后3d、7d及14d時明顯低于對照組與干預(yù)組(P＜0.05）。各脊髓損傷組在術(shù)后各時間點NF-200和GFAP陽性細胞數(shù)均高于假手術(shù)組(P＜0.05），治療組的NF-200陽性細胞數(shù)較對照組和干預(yù)組顯著增高（P＜0.05）;術(shù)后7d