石蒜生物堿分析方法的建立及其生物合成的研究.pdf

1、獨(dú)創(chuàng)性聲明本人聲明所呈交的論文是我個(gè)人在導(dǎo)師指導(dǎo)下進(jìn)行的研究工作及取得的研究成果。盡我所知，除了文中特別加以標(biāo)注和致謝的地方外，論文中不包含其他人已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究成果，也不包含為獲得安徽農(nóng)業(yè)大學(xué)或其它教育機(jī)構(gòu)的學(xué)位或證書而使用過的材料。與我一同工作的同志對(duì)本研究所做的任何貢獻(xiàn)均己在論文中作了明確的說明并表示了謝意。研究生簽名：橢凱時(shí)IBj：wf∥年6只‘R關(guān)于論文使用授權(quán)的說明本人完全了解安徽農(nóng)業(yè)大學(xué)有關(guān)保留、使用學(xué)位論文的規(guī)定，

2、即：學(xué)校有權(quán)保留送交論文的復(fù)印件和磁盤，允許論文被查閱和借閱，可以采用影印、縮印或掃描等復(fù)制手段保存、匯編學(xué)位論文。同意安徽農(nóng)業(yè)大學(xué)可以用不同方式在不同媒體上發(fā)表、傳播學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容。(保密的學(xué)位論文在解密后應(yīng)遵守此協(xié)議)研究生簽名：壅紐時(shí)間：加廠z年莎月廠同第一導(dǎo)師簽名：PJ：hl。年‘具6日摘要本試驗(yàn)主要研究了石蒜鮮樣提取生物堿的方法，優(yōu)化了薄層色譜分離石蒜生物堿的條件，利用薄層色譜分離制備石蒜生物堿單品，初步優(yōu)化了柱層析

3、分離生物堿的條件，建立了高效液相色譜法分析石蒜生物堿的方法，測(cè)定了不同月份石蒜鱗莖和葉中生物堿的含量以及各部位中生物堿的含量，試驗(yàn)還研究了石蒜芽誘導(dǎo)的體系，分析了芽生長(zhǎng)過程中的生物堿的變化以及加蘭他敏和酪胺對(duì)其生物堿合成的影響，初步探討了石蒜生物堿的生物合成途徑。獲得以下試驗(yàn)結(jié)果：1鮮樣提取石蒜生物堿。試驗(yàn)確定了石蒜鮮樣生物堿較好的提取條件為浸提液為90％乙醇、微波功率320W處理6060S、浸取時(shí)間為1h。此法不僅省時(shí)，而且能節(jié)省材料

4、，適宜于處理少量、珍貴的材料。2石蒜生物堿的薄層色譜分析方法。試驗(yàn)結(jié)果表明單向薄層色譜中展開劑三氯甲烷：甲醇：氨水為9：1：O1時(shí)的分離效果最好；雙向薄層色譜中以乙酸乙酯：甲醇：氨水=9：1：01為第一向，以三氯甲烷：甲醇：氨水=9：1：O1為第二向，分離效果比單向薄層色譜更好。利用雙向TLC法制備了15種生物堿單品，并且生物堿的純度較高。此法操作較簡(jiǎn)單，對(duì)石蒜生物堿的分析有較大價(jià)值。3石蒜生物堿的柱層析分離。本試驗(yàn)研究了生物堿的硅膠柱

5、層析初步分離純化，結(jié)果表明柱床體積80cm3、上樣15mL濃度100ggmL～、流速20BVh～，洗脫劑為乙酸乙酯：甲醇：氨水=9：1：005是柱層析分離石蒜生物堿的最佳條件，生物堿分離效果較好，適宜于大量生物堿的初步分離和純化。4高效液相色譜法(HPLC)分析石蒜生物堿，結(jié)果表明在ZORBAXODSC】8柱上，流動(dòng)相為A三乙胺水溶液(三乙胺濃度09％，pH80)，B乙腈，C甲醇，采用梯度洗脫方式，流速1mLmin～，檢測(cè)波長(zhǎng)234nm

6、，可有效分離出14種石蒜生物堿，此法可以同時(shí)分析十幾種生物堿，且準(zhǔn)確率較高，為石蒜生物堿的研究提供精確的分析手段。5試驗(yàn)確定了鱗莖和葉不同月份的生物堿含量差異很大，加蘭他敏、力可拉敏和石蒜堿的含量變化趨勢(shì)一致。不同部位中生物堿差異也較大，生物堿含量最高的為葉，其余依次為鱗莖、根、花和花葶，為合理利用石蒜資源提供了試驗(yàn)依據(jù)。6組織培養(yǎng)誘導(dǎo)石蒜芽的試驗(yàn)表明芽誘導(dǎo)最佳培養(yǎng)基是MS6一BA30mgL。1上NAAO2mgL～，小鱗莖生根最佳培養(yǎng)基