萬壽菊殘渣的成分分離與抗癌活性研究.pdf

1、萬壽菊，為菊科萬壽菊屬中最有名的一類植物，主要被用于提取葉黃素。本課題以萬壽菊殘渣為研究對象，采用離線二維制備型高效液相色譜法，結合實時無標記細胞分析技術，從提取工藝的選擇、二維正交高效液相色譜方法的建立、活性單體化合物的制備及抗癌活性藥效學評價這四個方面展開研究，旨在建立一種生物活性指導下的活性單體化合物的分離方法，為新藥開發(fā)提供有價值的有效信息，奠定一定的物質(zhì)基礎。
　　通過考察影響萬壽菊提取效果的因素，如提取次數(shù)、提取時間、

2、提取溫度和料液比等，對萬壽菊提取工藝進行優(yōu)化，從而得到最適合萬壽菊殘渣提取的工藝條件：以乙醇為溶劑，料液比1：5，60℃下回流提取3次，每次120 min。
　　對按最佳工藝條件提取得到的萬壽菊殘渣醇提物進行一維液相色譜分離。運用正相Innoval silica柱和反相DAISO C18進行初步的一維分離分析，最終選取了正相的分離方式。在一維制備中，共得到了9個粗組分，為后續(xù)的二維分離起到了提高效率的作用。在分離過程中結合實時無標

3、記細胞分析技術，篩選得到3個抗腫瘤活性組分。
　　進一步對3個活性組分進行二維色譜分離。通過考察不同色譜柱對樣品的分離情況，從而建立了一個由Innoval silica柱和Diol柱所組成的離線二維色譜分離系統(tǒng)。該系統(tǒng)對萬壽菊殘渣中的黃酮類物質(zhì)呈現(xiàn)出較好的保留和選擇性。在二維制備中，得到了8個化合物，純度都在96％以上。結合核磁數(shù)據(jù)對其進行表征，結果顯示，主要為黃酮類以及有機酸類化合物，其中化合物3（6-羥基山萘酚）是首次從萬壽菊

4、屬植物中被分離得到。
　　對分離得到的化合物進行抗癌活性篩選，結果表明，化合物2和3對于A549和Hep-G2細胞均有一定的抑制作用，化合物4和5能顯著抑制A549細胞活性，而對Hep-G2細胞的抑制作用不明顯。對于得率最高的化合物5（槲皮萬壽菊素）進行進一步的安全性評價和體內(nèi)活性驗證研究。急毒試驗結果顯示，槲皮萬壽菊素在給藥劑量0.63 g/kg-10.0 g/kg范圍內(nèi)，小鼠生活狀態(tài)良好，無死亡現(xiàn)象，表明該活性成分安全有效。采

5、用Lewis肺癌和H22肝癌小鼠模型，通過考察對小鼠的常規(guī)生理指標的影響、對實體瘤的抑制作用來評價槲皮萬壽菊素的抗癌活性。實驗結果表明，在給藥劑量為180 mg/kg、服藥天數(shù)為10天時，其對小鼠Lewis肺癌和H22肝癌模型具有一定的療效，抑瘤率分別達到47.72%和46.27%，接近于陽性藥物環(huán)磷酰胺的療效。
　　總之，本課題中所構建生物活性指導下的離線二維色譜分離系統(tǒng)在快速、有效地獲得萬壽菊殘渣中的抗癌活性化合物上起到了至關