化濁解毒活血通絡(luò)法對大鼠腦缺血再灌注損傷神經(jīng)細(xì)胞凋亡和Bcl-2、Bax蛋白表達(dá)的影響.pdf

1、目的：觀察化濁解毒活血通絡(luò)方對腦缺血再灌注損傷模型大鼠神經(jīng)細(xì)胞凋亡和相關(guān)蛋白Bcl-2及Bax表達(dá)的影響，從細(xì)胞凋亡相關(guān)基因角度揭示其對腦缺血再灌注損傷后的神經(jīng)保護(hù)作用。
　　方法：以改進(jìn)后的Zea-Longa線栓法通過阻斷大鼠右側(cè)大腦中動脈制造局部梗死性腦缺血再灌注損傷模型。選取合格雄性成年SD大鼠54只，隨機(jī)分配給假手術(shù)組（即正常組）、模型組、阿司匹林組（即對照組）、化濁解毒活血通絡(luò)方低劑量組（簡稱“中藥低劑量組”）、化濁解毒

2、活血通絡(luò)方中劑量組（簡稱“中藥中劑量組”）、化濁解毒活血通絡(luò)方高劑量組（簡稱“中藥高劑量組”）六組，每組9只（n=9）。各組實(shí)驗(yàn)動物均于造模成功后進(jìn)行神經(jīng)系統(tǒng)功能缺損評分，并于第2天分別給予藥物治療，假手術(shù)組與模型組兩組以0.9％氯化鈉替代藥物不給予治療，阿司匹林組給以阿司匹林溶液灌胃，應(yīng)用中藥治療的不同濃度三組大鼠分別予相應(yīng)化濁解毒活血通絡(luò)方中藥湯劑。持續(xù)灌服治療14天記錄實(shí)驗(yàn)動物治療過程中一般情況，按實(shí)驗(yàn)計劃再次評定各組實(shí)驗(yàn)動物神經(jīng)

3、功能缺損程度，后迅速斷頭處死取各組大鼠梗死側(cè)大腦半球腦組織分別進(jìn)行HE染色，在電子光鏡下拍照留圖以觀察腦組織缺血區(qū)域細(xì)胞形態(tài)變化，TUNEL法標(biāo)記凋亡細(xì)胞統(tǒng)計陽性細(xì)胞數(shù)并計算凋亡率，應(yīng)用熒光定量PCR法評測各組大鼠缺血側(cè)腦組織中Bcl-2及Bax蛋白的表達(dá)。
　　結(jié)果：⑴各組用藥后14天大鼠神經(jīng)功能缺損評分對比顯示：與模型組相比，中藥高劑量組及阿司匹林組大鼠神經(jīng)功能缺損程度明顯降低肢體功能恢復(fù)良好，具有顯著統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05

4、），中藥中劑量及中藥低劑量組無顯著統(tǒng)計學(xué)差異（P＞0.05）；中藥高劑量組大鼠神經(jīng)功能缺損評分與阿司匹林組相比統(tǒng)計學(xué)差異無顯著性（P＞0.05）；與中藥低劑量組比較，中藥中劑量組和中藥高劑量組神經(jīng)功能缺損評分普遍下降，有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）；與中藥中劑量組相比較中藥高劑量組大鼠神經(jīng)功能缺損體征改善更優(yōu)（P＜0.05）。⑵Tunel染色的陽性細(xì)胞結(jié)果分析顯示：與假手術(shù)組相比，其余各組細(xì)胞凋亡率均明顯上升（P＜0.05）；與模型組相比

5、，各用藥組細(xì)胞凋亡率呈下降趨勢（P＜0.05）；阿司匹林組與中藥高劑量組無明顯統(tǒng)計學(xué)差異（P＞0.05）；與中藥高劑量組相比，中藥中劑量組細(xì)胞凋亡率無明顯降低（P＞0.05）。⑶Bcl-2基因陽性細(xì)胞表達(dá)結(jié)果：與假手術(shù)組比較，模型組Bcl-2基因的表達(dá)水平明顯升高（P＜0.05）；與模型組比較，各用藥組Bcl-2基因的表達(dá)水平均升高，具有顯著性差異（P＜0.05）；與阿司匹林組比較，中藥三組調(diào)高Bcl-2表達(dá)效果顯著（P＜0.05）；且

6、與中藥低劑量組相比，中藥中劑量組和中藥高劑量組Bcl-2表達(dá)明顯升高（P＜0.05）。⑷Bax基因陽性細(xì)胞表達(dá)結(jié)果顯示：與假手術(shù)組比較，其余各組Bax基因的表達(dá)水平均升高，具有顯著性差異（P＜0.05）；與模型組比較，各給藥組Bax表達(dá)水平下降，有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）；與阿司匹林組相比，中藥低劑量組Bax表達(dá)明顯處于較高水平，差異具有顯著性（P＜0.05）；與中藥低劑量組相比，中藥中劑量組和中藥高劑量組 Bax表達(dá)明顯減少（P＜0