XPC蛋白缺失對膀胱癌細胞自噬影響的初步研究.pdf

1、目的:
　　著色性干皮病C組基因(xeroderma pigmentosum group C，XPC)蛋白是核苷酸切除修復(nucleotide excision repair, NER)中最早的損傷識別因子，在DNA的損傷應答及維持細胞遺傳穩(wěn)定性方面扮演重要角色。自噬是細胞進化過程中高度保守的一個維持穩(wěn)態(tài)的生命過程，具有降解蛋白質(zhì)及清除細胞器的能力，在生物體正常發(fā)育及應對、處理環(huán)境威脅時發(fā)揮極為關(guān)鍵的作用。自噬同樣參與到DNA損

2、傷應答過程中，并在DNA損傷應答過程中發(fā)揮重要作用。在我們早期研究中發(fā)現(xiàn)，作為最早的損傷識別因子，XPC還扮演很多其他角色，但其是否參與自噬，尚未見報道。本研究將針對XPC蛋白缺失對膀胱癌細胞自噬的影響進行初步研究，以期為膀胱癌的臨床治療提供更多線索。
　　方法:
　　我們利用課題組已建好的穩(wěn)定抑制XPC蛋白表達的膀胱癌T24及HEK293細胞模型;使用氯喹(chloroquine，CQ)抑制自噬小體的降解，從而更好的觀察自

3、噬小體的積累情況;使用免疫印跡技術(shù)觀察XPC干擾前后自噬表征蛋白LC3Ⅱ的表達情況;瞬時轉(zhuǎn)染GFP-LC3，使用熒光顯微鏡觀察細胞的熒光聚集情況;CCK-8法觀察細胞的增殖情況;免疫印跡技術(shù)觀察自噬及凋亡相關(guān)蛋白的表達。
　　結(jié)果:
　　1.干擾XPC后，自噬小體聚集減少，GFP-LC3熒光明顯聚集的細胞比例降低;
　　2.使用順鉑誘導細胞自噬發(fā)生，發(fā)現(xiàn)干擾XPC后，自噬小體聚集減少，GFP-LC3熒光明顯聚集的細胞比

4、例降低;
　　3.使用順鉑持續(xù)刺激HEK293細胞，干擾XPC后LC3Ⅱ的表達趨勢發(fā)生改變:HEK293NC細胞對順鉑反應緩慢，為逐漸上升后逐漸下降;而HEK293shXPC細胞對順鉑反應迅速，在迅速達到高峰后逐漸下降;
　　4.使用順鉑持續(xù)刺激膀胱癌T24細胞，發(fā)現(xiàn)干擾XPC后LC3Ⅱ的表達趨勢發(fā)生改變:膀胱癌T24NC細胞對順鉑反應緩慢，為逐漸上升;而膀胱癌T24shXPC細胞對順鉑反應迅速，在迅速達到高峰后逐漸下降。<

5、br>　　5.干擾XPC后，HEK293細胞對順鉑敏感性增強，DNA損傷應答相關(guān)蛋白p-ATM(S1981)、p53表達均上調(diào);膀胱癌T24細胞對順鉑敏感性降低，DNA損傷應答相關(guān)蛋白p-ATM(S1981)表達上調(diào)、p53表達下調(diào)。
　　結(jié)論:
　　XPC蛋白缺失后，HEK293細胞及膀胱癌T24細胞的自噬降低，同時在順鉑誘導的DNA損傷下自噬降低，HEK293細胞對順鉑的敏感性增強，而膀胱癌T24細胞對順鉑的敏感性降低;