新型常溫機(jī)械灌注裝置保存豬DCD供腎的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：腎臟移植已成為治療腎功能衰竭患者主要手段，但是由于供體的嚴(yán)重短缺，在現(xiàn)有的法律條件下，越來越多的心臟死亡（DCD）供腎應(yīng)用于臨床。但是，對于經(jīng)歷較長熱缺血時(shí)間的DCD供腎而言，目前通用的UW液單純低溫保存方法已不能滿足臨床需求，腎移植術(shù)后原發(fā)性移植物無功能（PNF）、移植物功能延遲恢復(fù)（DGF）等發(fā)生率均明顯增加，亦缺乏精確的供腎活力方式，主要依靠臨床評分、活檢組織學(xué)檢查、低溫機(jī)械灌注參數(shù)等。近年來出現(xiàn)的常溫機(jī)械灌注技術(shù)（NMP）

2、優(yōu)勢在于最大限度地模擬供腎的生理?xiàng)l件，維持腎臟正常的生理機(jī)能及代謝環(huán)境。本研究擬構(gòu)建新型NMP系統(tǒng)，利用豬自體腎移植模型，探討NMP對豬DCD供腎活力評估、減輕熱缺血及缺血再灌注損傷，改善供腎保存質(zhì)量的意義及相關(guān)機(jī)制。
　　方法：
　　1. NMP保存裝置的建立：采用離心泵、恒溫水浴箱、膜式氧合器、濾栓濾泡裝置、肝素化涂層管路、壓力傳感器、流量及溫度傳感器等部件構(gòu)建腎臟NMP保存裝置，通過對10只巴馬小型豬腎臟的NMP保存預(yù)

3、實(shí)驗(yàn)，觀察灌注保存期間腎臟表面溫度、腎動脈的壓力及流量、腎組織的常規(guī)病理及超微結(jié)構(gòu)變化、尿量等指標(biāo)；
　　2.建立豬自體腎移植模型：選用健康巴馬小型豬10只，將右腎切除后灌注，其后將左腎切除，將保存后的右腎移植至左腎處。觀察術(shù)中血流動力學(xué)變化、動脈血?dú)庵笜?biāo)變化、術(shù)后存活率以及術(shù)后并發(fā)癥發(fā)生情況，驗(yàn)證模型穩(wěn)定性；
　　3.NMP對豬DCD供腎保存的實(shí)驗(yàn)研究：選用健康巴馬小型豬10只，隨機(jī)分為兩組，在原位夾閉右腎動脈30min后

4、，UW液低溫灌注，A組（n=5）以NMP保存8h，B組（n=5）以UW液4℃低溫保存8h，然后兩組均行自體腎移植術(shù)，比較術(shù)后血清生化指標(biāo)、腎組織病理變化、細(xì)胞因子的表達(dá)情況、5d存活率等指標(biāo)。
　　結(jié)果：
　　1.成功建立穩(wěn)定的新型腎臟NMP裝置，對小型豬正常腎臟進(jìn)行體外灌注保存過程中，溫度維持恒定、腎動脈的壓力及流量穩(wěn)定、尿量正常；
　　2.經(jīng)過預(yù)試驗(yàn)后，豬自體腎移植術(shù)后5天存活率達(dá)100％，無手術(shù)相關(guān)并發(fā)癥；

5、>　　3. A組可以通過每小時(shí)尿量變化、腎動脈壓力及流量、乳酸水平、葡萄糖消耗速度等指標(biāo)準(zhǔn)確判斷腎臟活力變化；B組無法判斷精確、動態(tài)地判斷腎臟活力。兩組均成功在經(jīng)過30min熱缺血和8h保存后，進(jìn)行自體腎移植。血流開放1h后，A組腎組織免疫組化TNF-α、Caspas-3、ET-1水平明顯低于B組，TUNEL法測定凋亡細(xì)胞比例亦明顯低于B組，兩組間比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異；血流開放6h后，A組血清肌酐、TNF-α、Caspas-3水平明顯低于B

6、組，兩組間比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異；A組每小時(shí)尿量明顯高于B組，兩組間比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異；開放后腎臟活檢常規(guī)病理檢查提示，A組腎臟損傷程度明顯減輕。A和B組術(shù)后5天存活率分別為100%和20%，兩組間比較具有顯著性差異。
　　結(jié)論：
　　1.本研究成功建立腎臟NMP保存裝置；
　　2.成功建立豬自體腎移植模型；
　　3.經(jīng)豬自體腎移植模型證實(shí)，NMP保存可明顯減輕豬DCD供腎的缺血再灌注損傷，其作用機(jī)制與NMP可模擬器官的