AP-2β和p53相互作用并調(diào)控CRYAB基因的轉(zhuǎn)錄.pdf

1、晶狀體蛋白CRYAB是小熱激蛋白家族的一員,許多脅迫或病理?xiàng)l件可以誘導(dǎo)CRYAB基因的表達(dá)。在脅迫條件下CRYAB作為分子伴侶起作用,可阻止變性蛋白聚集和細(xì)胞凋亡,促進(jìn)細(xì)胞存活。在許多神經(jīng)性疾病和惡性腫瘤中CRYAB基因過量表達(dá)。因此,研究CRYAB基因的轉(zhuǎn)錄調(diào)控機(jī)制具有重要意義。
　　 為了鑒定調(diào)控CRYAB基因轉(zhuǎn)錄的調(diào)節(jié)因子,我們通過生物信息學(xué)軟件查找CRYAB基因啟動(dòng)子上潛在的轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合位點(diǎn)。除了以前報(bào)道的轉(zhuǎn)錄因子p53

2、結(jié)合位點(diǎn),我們還發(fā)現(xiàn)了轉(zhuǎn)錄因子AP-2的四個(gè)結(jié)合位點(diǎn)。隨后,我們將包含有四個(gè)AP-2結(jié)合位點(diǎn)及一個(gè)p53結(jié)合位點(diǎn)的CRYAB啟動(dòng)子序列克隆到熒光素酶報(bào)告基因載體pGL3-basic中,并將這個(gè)質(zhì)粒分別與AP-2α、AP-2β共轉(zhuǎn)入含野生型p53的細(xì)胞系HeLa中,通過熒光素酶分析實(shí)驗(yàn)證明過表達(dá)AP-2α或AP-2β都能增強(qiáng)CRYAB啟動(dòng)子的轉(zhuǎn)錄活性,且AP-2β的作用更強(qiáng)。但在無p53的細(xì)胞系H358中,單獨(dú)表達(dá)AP-2β對(duì)CRYAB啟

3、動(dòng)子活性沒有影響,而共轉(zhuǎn)入AP-2β和p53時(shí)CRYAB啟動(dòng)子活性高于單獨(dú)轉(zhuǎn)入p53時(shí)的活性。這些結(jié)果暗示AP-2β通過p53增強(qiáng)CRYAB啟動(dòng)子活性。為了進(jìn)一步驗(yàn)證這個(gè)結(jié)果,我們利用了一個(gè)只含有p53結(jié)合位點(diǎn)而沒有AP-2結(jié)合位點(diǎn)的熒光素酶報(bào)告基因載體pp53-TA-Luc去檢測(cè)p53轉(zhuǎn)錄激活活性。將pp53-TA-Luc與AP-2β、p53共轉(zhuǎn)入H358細(xì)胞中,發(fā)現(xiàn)單獨(dú)轉(zhuǎn)染AP-2β不影響pp53-TA-Luc熒光素酶活性,而AP-

4、2β和p53共轉(zhuǎn)染時(shí),pp53-TA-Luc活性比單獨(dú)轉(zhuǎn)染p53時(shí)提高60.4％,說明AP-2β能增強(qiáng)p53的轉(zhuǎn)錄激活活性。
　　 為了探討AP-2β增強(qiáng)p53的轉(zhuǎn)錄激活活性的分子機(jī)制,我們通過免疫共沉淀實(shí)驗(yàn)證實(shí)AP-2β蛋白能和p53蛋白相互作用。并且,我們還發(fā)現(xiàn)AP-2β和p53共表達(dá)時(shí),AP-2β能增強(qiáng)p53蛋白的穩(wěn)定性。由此我們得到結(jié)論,AP-2β與p53結(jié)合并加強(qiáng)p53的穩(wěn)定性,從而增強(qiáng)由p53介導(dǎo)的CRYAB基因的轉(zhuǎn)