黑腹果蠅黑條體突變型條紋基因（stripe）的克隆與定位.pdf

1、黑腹果蠅新的突變體是研究生物體復(fù)雜性狀良好的實(shí)驗(yàn)材料。本實(shí)驗(yàn)室黑腹果蠅 (Drosophial melanogaster)自發(fā)突變體在體色表型上分化出深黑色和褐體色，在背甲上表現(xiàn)出明顯不同數(shù)量(0、1、3、5)的縱向黑條紋，各體色和條紋品系自交，后代中仍然有極少交叉性狀的出現(xiàn)。目前，體色突變基因的定位和序列測(cè)定工作已經(jīng)完成，本研究的主要目的在于探討和確定條紋突變基因的定位和克隆。已知stripe基因的突變體表型與本研究對(duì)象的表型相似，故

2、首先對(duì)條紋突變體的stripe基因進(jìn)行克隆，然后利用常規(guī)雜交對(duì)條紋突變基因定位。由于srtipe基因過(guò)長(zhǎng)，不易對(duì)其全序列測(cè)定，只對(duì)外顯子序列進(jìn)行測(cè)定。根據(jù)果蠅stripe基因的序列設(shè)計(jì)了一系列特異性引物，對(duì)黑條體突變型的stripe基因進(jìn)行克隆和序列測(cè)定，結(jié)果發(fā)現(xiàn)黑條體在3’端不表達(dá)，與已公布的stripe基因序列相比，910910的cDNA缺失了60bp，換用果蠅總DNA為模版擴(kuò)增后測(cè)序，突變體的stripe基因序列沒(méi)有任何差別，91

3、0910的DNA序列和cDNA一致。同時(shí)測(cè)定了全國(guó)其他13個(gè)地方的野生型果蠅的stripe基因的3’端，結(jié)果與已公布的序列相同。常規(guī)雜交選用位于第一染色體上的黃體基因(yellow)突變體、位于第二染色體上的褐體基因(brown)突變體和位于第三染色體上的條紋基因(stripe)突變體，對(duì)黑條體突變型的條紋基因的定位進(jìn)行探討。雜交結(jié)果表明，條紋突變基因和vellow 以及 brown不在同一染色體上，符合自由組合規(guī)律。黑條體和條紋基因突

4、變體雜交，子一代有極少量沒(méi)有條紋的個(gè)體，子二代也有部分沒(méi)有條紋，進(jìn)一步的雜交證明，黑條體分化的沒(méi)有條紋的個(gè)體與5條條紋的個(gè)體雜交，后代均有條紋，而野生型果蠅和5條條紋個(gè)體雜交，子一代均沒(méi)有條紋，說(shuō)明黑條體和條紋基因突變體雜交的F1中的沒(méi)有條紋個(gè)體是黑條體所分化的0條個(gè)體。由此得出結(jié)論：910910是一種新的野生型品系，目前還不清楚910910和黑條體突變體有沒(méi)有直接的聯(lián)系；黑條體條紋突變基因就是位于第三染色體上的stripe基因，但st