制備傷寒疫苗大腸桿菌發(fā)酵過程的質(zhì)量控制及影響.pdf

1、近幾年來，GMP、GLP及相關質(zhì)量控制的理念逐漸深入到生物制品生產(chǎn)及實驗的整個過程中。蘭州生物制品研究所第一研究室研制的傷寒Vi多糖蛋白結(jié)合疫苗是以重組銅綠假單胞菌外毒素A（rEPA）為蛋白，由大腸桿菌表達，因此，宿主大腸桿菌發(fā)酵后菌群質(zhì)量和量的高低直接影響了傷寒Vi多糖蛋白結(jié)合疫苗的產(chǎn)量。
　　本次試驗是根據(jù)GMP的相關質(zhì)量控制要求，運用質(zhì)量管理手段和工具，對宿主大腸桿菌發(fā)酵過程及其涉及的相關實驗系統(tǒng)實施質(zhì)量控制，實驗結(jié)果如下：

2、
　　1、實驗室系統(tǒng)的影響性評估。依據(jù)系統(tǒng)影響性評估原理，對傷寒Vi多糖蛋白結(jié)合疫苗實驗室系統(tǒng)進行了系統(tǒng)影響性評估，該階段評估結(jié)果為：
　?。?）直接影響系統(tǒng)包括：空氣凈化系統(tǒng)、工藝用水系統(tǒng)、工藝氣體系統(tǒng)、發(fā)酵系統(tǒng)、高壓滅菌系統(tǒng)、干熱滅菌系統(tǒng)、實驗室檢定系統(tǒng)、生物安全柜，中空纖維系統(tǒng)、層析系統(tǒng)、37℃恒溫培養(yǎng)、地秤、藥品保存箱、37℃搖床式培養(yǎng)箱；
　?。?）間接影響系統(tǒng)為：冰箱、配電系統(tǒng)；
　?。?）無影響系統(tǒng)

3、是：消防系統(tǒng)、洗衣機。
　　2、發(fā)酵系統(tǒng)關鍵組分評估。依據(jù)關鍵組分評估原理，對大腸桿菌發(fā)酵系統(tǒng)進行了關鍵組分評估，該階段評估結(jié)果為：
　?。?）發(fā)酵系統(tǒng)的關鍵組分，包括：罐體、pH傳感器、DO傳感器、溫度傳感器、計算機控制單元、攪拌器、轉(zhuǎn)速傳感器、消泡漿、消泡傳感器、流量計、壓力表、CIP控制單元。
　　（2）發(fā)酵系統(tǒng)的非關鍵組分，包括：夾套、進料口、出料口、人孔、電機、控制閥門、電路。
　　3、風險管理。該階段

4、經(jīng)過風險識別、風險分析、風險評估，最終確定出實驗中各組分的風險級別：pH值、DO值、溫度、系統(tǒng)壓力及發(fā)酵系統(tǒng)的無菌性為發(fā)酵過程中的高風險點，需要進行風險控制。
　　4、高風險點的管控。該階段分為驗證和計量兩個部分：
　　（1）驗證部分：實驗針對直接影響系統(tǒng)中的脈動真空滅菌器、生物安全柜和發(fā)酵罐進行了驗證，通過驗證發(fā)現(xiàn)脈動真空滅菌器存在溫度漂移現(xiàn)象，經(jīng)過維修和調(diào)試后再次驗證，其滅菌能力符合GMP要求。
　　（2）計量部分

5、：根據(jù)關鍵組分評估和風險評估的結(jié)果，對pH傳感器、DO傳感器、溫度傳感器、系統(tǒng)壓力表、流量計、轉(zhuǎn)速傳感器以及實驗室檢定系統(tǒng)中的分光光度計、pH計、電子天平、電泳儀、凝膠成像系統(tǒng)、顯微鏡等儀器設備進行計量，對故障壓力表進行了更換。
　　5、宿主大腸桿菌的發(fā)酵實驗。在實施質(zhì)量控制前后分別對宿主大腸桿菌進行了連續(xù)三批發(fā)酵培養(yǎng)，通過培養(yǎng)結(jié)果對比可知，質(zhì)量控制后的發(fā)酵結(jié)果優(yōu)于質(zhì)量控制前，菌體密度（OD600值）由17～25之間增加至27～3