芥菜幾丁質(zhì)酶基因BjCHI1啟動子功能的初步分析.pdf

1、芥菜(1Brassica iuncea)幾丁質(zhì)酶基因BjCHIL受傷害、茉莉酸、蟲食、真菌侵染等的誘導(dǎo)，因此BjCHIL啟動子是一個誘導(dǎo)型啟動子。目前報(bào)道的轉(zhuǎn)基因作物中，驅(qū)動導(dǎo)入的外源基因表達(dá)大多數(shù)是強(qiáng)表達(dá)的組成型啟動子，使得這些基因幾乎在轉(zhuǎn)基因植物的所有部位和所有發(fā)育階段都高效表達(dá)，這無疑增加了植株的代謝負(fù)擔(dān)，造成物質(zhì)和能源上的巨大浪費(fèi)。因此，研究和利用組織器官特異性啟動子和誘導(dǎo)型啟動子具有非常重要的應(yīng)用價值和理論意義。本研究的主要目

2、的是將芥菜BjCHIl啟動子導(dǎo)入煙草，初步鑒定該啟動子的功能。 本研究通過銜接頭：PCR技術(shù)，于芥菜BjCHIl啟動子BjC-p(1098bp)5、端成功延伸了280bp的片段，獲得長度為1378bp的芥菜BjCHIl全長啟動子BjC-p1，將其序列與GenBank中已知序列進(jìn)行對比，發(fā)現(xiàn)在GenBank中目前還沒有該啟動子的注冊信息。 為了驗(yàn)證其功能，用芥菜BjCHIl啟動子片段BjC-pO(1287bp)取

3、代pBll21上的35S啟動子，構(gòu)建成植物表達(dá)載體pBICHPO。用農(nóng)桿菌介導(dǎo)法將攜帶芥菜BjCHIl啟動子片段的植物表達(dá)載體pBICHPO、pBICHP2和pBICttP5以煙草K326無菌苗葉片為轉(zhuǎn)化受體進(jìn)行浸染轉(zhuǎn)化?？偣搏@得103株P(guān)CR陽性煙草植株，其中29株pBICHPO、2l株pBICHP2和0株pBICttP5為GUS陽性植株。 對轉(zhuǎn)基因煙草(苗期4葉期)的GUS活性分析表明：(1)BjC-pO和BiC-p2

4、驅(qū)動的GUS基因在傷害處理前幾乎沒有活性，但傷害處理3h之后，BjC-pO的GUS活性是處理前的29.85倍，BjC-p2的GUS活性是處理前的2.71倍；誘導(dǎo)處理后GUS活性強(qiáng)度為BjC-p0大于BjC-p2；(2)BjC-p5在傷害處理前后幾乎沒有活性，且變化不大，以上結(jié)果與GUS組織化學(xué)染色結(jié)果相符；(3)當(dāng)轉(zhuǎn)基因煙草生長至大于苗期4葉期時，傷害誘導(dǎo)前后BjC-p0、BjC-p2的GUS基因活性變化不大，表達(dá)強(qiáng)度為BjC-p0大于