組蛋白去乙酰化酶抑制劑篩選模型的建立及中藥有效組分的篩選.pdf

1、基因的正常表達(dá)與調(diào)控是機(jī)體正常生長(zhǎng)發(fā)育所必需的。組蛋白乙酰轉(zhuǎn)移酶(histoneacetyltransferases，HAT)和組蛋白去乙?；?histonedeacetylase，HDAC)可以通過調(diào)節(jié)組蛋白或轉(zhuǎn)錄因子的乙?；癄顟B(tài)來調(diào)節(jié)基因的活化或沉默。HAT引發(fā)染色質(zhì)結(jié)構(gòu)的松散，激活轉(zhuǎn)錄；而HDAC則可導(dǎo)致染色質(zhì)集縮，并抑制特定靶基因的轉(zhuǎn)錄。組蛋白去乙?；敢种苿?histonedeacetylaseinhibitors，HDAC

2、i)能抑制HDAC的活性，并通過改變組蛋白或轉(zhuǎn)錄因子的乙?；癄顟B(tài)誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)停滯、分化或凋亡，具有明顯的抗腫瘤活性。 p21WAF1/CIP1基因編碼的蛋白是一種細(xì)胞周期依賴性蛋白激酶因子(CDKI)，在細(xì)胞周期調(diào)控，細(xì)胞凋亡和細(xì)胞分化中都起著重要的作用。研究表明，p21WAF1/CIP1基因作為一種重要的抑癌基因，其表達(dá)量的多少與腫瘤密切相關(guān)。p21WAF1/C1P1基因的低表達(dá)，可造成異常細(xì)胞增生，有益于腫瘤的形成。在

3、乳腺癌、結(jié)腸癌、卵巢癌等多種癌癥中，p21WAF1/CIP1基因的表達(dá)明顯降低。最近的研究表明，組蛋白去乙?；敢种苿㏕SA、NaB、PB、SAHA、FK-228、MS-275和Oxamflatin等可以誘導(dǎo)p21WAF1/CIP1基因表達(dá)的增加，而且這種誘導(dǎo)主要發(fā)生在轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)水平上，因此，利用p21WAF1/CIP1基因啟動(dòng)子構(gòu)建的報(bào)告基因系統(tǒng)作為藥物篩選的模型，完全有可能篩選到新的組蛋白去乙?；敢种苿?，并最終用于相關(guān)癌癥的治療。

4、 本論文旨在建立一種簡(jiǎn)便易行、高度敏感和高效率的篩選組蛋白去乙?；敢种苿┑姆椒ê图夹g(shù)平臺(tái)，并用于從現(xiàn)有中藥組分庫(kù)中篩選組蛋白去乙?；敢种苿?。將以組蛋白去乙?；笧榘袠?biāo)的篩選模型用于從現(xiàn)有中藥化學(xué)組分庫(kù)中篩選抑制劑的研究是本論文的創(chuàng)新點(diǎn)。 我們通過構(gòu)建含有p21WAF1/CIP1基因啟動(dòng)子的報(bào)告基因質(zhì)粒，經(jīng)轉(zhuǎn)染293細(xì)胞后，篩選得到含有p21WAF1/C1P1基因啟動(dòng)子報(bào)告基因的穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞系，然后以該細(xì)胞系為組蛋白