雌激素通過(guò)EphB-EphrinB信號(hào)通路對(duì)破骨細(xì)胞分化的調(diào)節(jié).pdf

1、絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松是絕經(jīng)后婦女的常見(jiàn)病。絕經(jīng)后,雌激素缺失造成破骨細(xì)胞和成骨細(xì)胞功能異常,引起骨形成失衡。其中破骨細(xì)胞分化和功能異常造成的骨吸收增強(qiáng)是骨質(zhì)疏松發(fā)生重要的病理基礎(chǔ)。近期研究發(fā)現(xiàn)EphB/EphrinB家族在維持骨穩(wěn)態(tài)中發(fā)揮重要的作用,其雙向信號(hào)通路能夠同時(shí)影響正常小鼠成骨細(xì)胞和破骨細(xì)胞的分化。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)培養(yǎng)卵巢摘除骨質(zhì)疏松模型小鼠破骨細(xì)胞以及雌激素受體拮抗劑(ICI182780)、雌激素等誘導(dǎo)破骨細(xì)胞RAW264.7,研究雌激

2、素通過(guò)EphB/EphrinB對(duì)破骨細(xì)胞分化的調(diào)節(jié)。
　　方法:
　　1、采用雌激素及雌激素拮抗劑分別誘導(dǎo)培養(yǎng)RAW264.7破骨細(xì)胞系,培養(yǎng)至第8天提取RNA和蛋白質(zhì)樣品,利用RT-PCR和Western blot檢測(cè)破骨細(xì)胞系表達(dá)的相關(guān)Eph/Ephrin信號(hào)通路的變化。2、采用RANKL誘導(dǎo)法培養(yǎng)卵巢摘除骨質(zhì)疏松模型(OVX)組和假手術(shù)(sham)組小鼠的破骨細(xì)胞,于第10天提取兩組細(xì)胞的RNA和蛋白質(zhì)樣品,通過(guò)RT-

3、PCR和Western blot檢測(cè)細(xì)胞EphrinB2表達(dá)的變化。3、在 OVX模型組小鼠的破骨細(xì)胞培養(yǎng)中添加 EphrinB2配體EphB4-Fc片段,通過(guò)RT-PCR檢測(cè)破骨細(xì)胞標(biāo)志物的表達(dá)和抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色并計(jì)數(shù),觀察破骨細(xì)胞分化能力的變化。4、采用RANKL誘導(dǎo)法培養(yǎng)卵巢摘除骨質(zhì)疏松模型(OVX)組和假手術(shù)(sham)組小鼠的破骨細(xì)胞,通過(guò)RT-PCR檢測(cè)兩組細(xì)胞中EphrinB1表達(dá)的變化;在OVX模型組小

4、鼠的破骨細(xì)胞培養(yǎng)中添加EphrinB1配體EphB2-Fc片段,通過(guò)RT-PCR檢測(cè)破骨細(xì)胞標(biāo)志物的表達(dá),TRAP染色并計(jì)數(shù),觀察破骨細(xì)胞分化能力的變化。
　　結(jié)果:
　　1、雌激素拮抗劑組EphrinB2的表達(dá)量低于對(duì)照組(P<0.01),而雌激素組EphrinB2的表達(dá)量高于對(duì)照組(P<0.05);2、卵巢摘除骨質(zhì)疏松模型組小鼠EphrinB2的表達(dá)量低于假手術(shù)組(P<0.01);3、給予EphrinB2配體EphB4-

5、Fc片段后,OVX組小鼠的相關(guān)破骨細(xì)胞標(biāo)志物表達(dá)量降低(P<0.01;P<0.001),TRAP染色陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)減少;4、卵巢摘除骨質(zhì)疏松模型組小鼠EphrinB1的表達(dá)量低于假手術(shù)組(P<0.01);給予 EphrinB1配體 EphB2-Fc片段后,OVX組小鼠的相關(guān)破骨細(xì)胞標(biāo)志物表達(dá)量降低(P<0.05),TRAP染色陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)減少。
　　結(jié)論:
　　雌激素可能通過(guò)調(diào)節(jié)破骨細(xì)胞EphrinB2、EphrinB1的表達(dá)影響