蛋白質(zhì)高靈敏檢測分子熒光探針研究.pdf

1、蛋白質(zhì)是生命內(nèi)最重要的生物大分子，是生命活動的物質(zhì)基礎(chǔ)，是生物體內(nèi)一切組織的基礎(chǔ)物質(zhì)。并在生命現(xiàn)象和生命過程中起著決定性的作用，它與營養(yǎng)、酶、病毒、免疫、物質(zhì)運輸、遺傳、生命等都有密切關(guān)系。對蛋白質(zhì)進(jìn)行定量分析和特異識別探討生命機(jī)理是十分重要的，其濃度和結(jié)構(gòu)的研究在醫(yī)學(xué)及免疫等方面有著極其重要的意義，對生命奧秘的揭示、臨床診斷以及藥物篩選等領(lǐng)域的發(fā)展具有重要的意義。 在眾多的痕量蛋白的檢測方法中，熒光分析法因其具有靈敏度高、選擇

2、性好、動態(tài)響應(yīng)范圍寬以及測定條件更接近生命體的生理環(huán)境的優(yōu)點而在蛋白質(zhì)分析中應(yīng)用廣泛。熒光探針技術(shù)是利用物質(zhì)的光物理和光化學(xué)特性，在分子量級上研究溶液中蛋白質(zhì)高靈敏度的分析方法，因而近年來，隨著技術(shù)的不斷進(jìn)步，熒光探針法作為一種檢測新型的蛋白定量檢測方法．以其干擾少、快速、靈敏度高、準(zhǔn)確、實用性而備受關(guān)注． 本文嘗試用熒光染料試劑燦爛甲酚藍(lán)(Brilliant Bresol Blue，BCB)和吖啶橙(Acridine Oran

3、ge,AO)作為熒光探針，通過熒光探針法對Fau蛋白的定量檢測進(jìn)行了一系列的探索，通過系統(tǒng)研究兩種檢測體系的反應(yīng)條件，獲得確定的研究成果，主要內(nèi)容如下： l、分別以燦爛甲酚藍(lán)(brilliant cresol blue，BCB)和吖啶橙(Acridine Orange，AO)做為熒光探針，以人血清蛋白(HSA)作為蛋白質(zhì)模型分子，以Tris-HCI作為緩沖溶液作為介質(zhì)，討論了不同實驗條件，如溶液PH值，染料試劑的用量，試劑加入順

4、序，反應(yīng)時間，反應(yīng)溫度，溶液離子強(qiáng)度對熒光強(qiáng)度的影響，以此優(yōu)化了實驗條件。 2、通過實驗發(fā)現(xiàn)，在近似中性的范圍內(nèi)，燦爛甲酚藍(lán)(BCB)和人血清蛋白(HSA)結(jié)合，可使BCB溶液的熒光強(qiáng)度加強(qiáng)，且熒光強(qiáng)度的加強(qiáng)程度與蛋白質(zhì)的濃度具有較好的線性關(guān)系。其線性范圍為1×10.5-5mg/ml-2×10-2mg/ml，相關(guān)系數(shù)為0.9932，檢測限為9.93ng/ml，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差(n=6)為3.09％，實驗表明該方法使用簡單方便，具有較

5、高的靈敏度． 3、通過實驗對A0.SDS—HSA三元熒光體系的研究發(fā)現(xiàn)，在一定的條件下，蛋白質(zhì)的加入可使AO-SDS形成的聚合體解散，從而使體系的熒光強(qiáng)度加強(qiáng)，且熒光強(qiáng)度的加強(qiáng)程度與蛋白質(zhì)的加入量成正比。其線性范圍為2×10-6mg/ml-2×10-2mg/ml，相關(guān)系數(shù)為0.9984，檢測限為1.82ng/ml，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為1.61％，該方法相比于前一種方法具有更高的靈敏度且具有較強(qiáng)的抗干擾能力。 4、論文還使用了上邊兩種探