魚腥草HMGR基因片段的克隆及種質(zhì)親緣關(guān)系的ISSR分析.pdf

1、魚腥草藥蔬兼用，原植物為三白草科蕺菜屬蕺菜Houttuynia cordata Thunb.。具清熱解毒，消癰排膿，利尿通淋等功能，是魚腥草注射液的主要原料藥?，F(xiàn)代藥理試驗(yàn)證明其具抗菌、抗病毒、利尿作用，還可增強(qiáng)機(jī)體免疫功能。本文對魚腥草的有效成分、藥理作用和臨床應(yīng)用等方面的研究進(jìn)行分析歸納，認(rèn)為魚腥草生物活性較高，療效確切，值得進(jìn)一步推廣應(yīng)用，應(yīng)進(jìn)一步加強(qiáng)魚腥草的基礎(chǔ)研究，研制現(xiàn)代中藥新劑型。 近年來魚腥草的研究集中在其有效

2、成分、藥理作用、種植栽培和臨床應(yīng)用等方面，還鮮有在分子水平上的研究。本文從分子水平初步研究了魚腥草種質(zhì)資源，主要研究內(nèi)容有以下幾個(gè)方面： 魚腥草種子具有休眠特性，自然條件下萌發(fā)困難，發(fā)芽率低。本文采用低溫層積處理研究解除魚腥草種子休眠、促進(jìn)萌發(fā)、提高發(fā)芽率的方法。結(jié)果表明：低溫層積處理能夠促進(jìn)魚腥草種子發(fā)芽，并首次利用魚腥草有性繁殖進(jìn)行栽培。試驗(yàn)中最有效的處理是4℃層積處理8d，其發(fā)芽率達(dá)到86.0％，芽的生長情況較其它處理好

3、。 本文還利用NCBI、DDBJ、Blockmaker、CodeHop和Primer Premier 5.0等數(shù)據(jù)庫和生物軟件進(jìn)行簡并性引物設(shè)計(jì)了4對引物進(jìn)行RT-PCR，從魚腥草種苗中克隆到1個(gè)長度為670bp的cDNA片段。通過Blast檢索GenBank進(jìn)行同源性對比后，發(fā)現(xiàn)該片段與其他植物的HMGR基因具有較高的氨基酸序列同源性。研究表明，該片段推測為魚腥草HMGR基因片段，該程序化設(shè)計(jì)的簡并性引物可信性強(qiáng)，能迅速得到

4、滿意結(jié)果。 利用ISSR(inter-simple sequence repeat)分子標(biāo)記技術(shù)對17份魚腥草種質(zhì)進(jìn)行了基因組DNA多態(tài)性分析。從50條引物中篩選出12條多態(tài)性引物用于PCR擴(kuò)增，共擴(kuò)增出112條DNA條帶，其中多態(tài)性條帶95條，所占比例為84.82％，平均每條引物擴(kuò)增的DNA條帶數(shù)目為9.33條。根據(jù)ISSR擴(kuò)增結(jié)果，利用POPGENE1.32軟件計(jì)算了Nei’s基因距離，Nei’s基因多樣性指數(shù)(H)為0.