一株產(chǎn)耐高溫α-淀粉酶的地衣芽孢桿菌的篩選與分離及產(chǎn)酶條件與酶學性質(zhì)的研究.pdf

1、淀粉酶由一系列的酶組成，占據(jù)了酶市場的25％左右。高溫淀粉酶是廣泛應用于釀酒、制糖等食品行業(yè)，醫(yī)藥、紡織、印染和環(huán)境治理等行業(yè)也有重要應用。在當今，希望α-淀粉酶能夠在高溫下比如說凝膠化和液化有活性，這樣可以節(jié)約成本。嗜堿性、耐高溫淀粉酶能夠在溫度為80℃～100℃，pH為pH8.0～10.0的范圍仍然保持較高的活性。本文主要詳細研究了一株能夠分泌高溫淀粉酶的菌株的生長，產(chǎn)酶特征，以及其產(chǎn)生的高溫洳淀粉酶的一些特性。該菌株來自西藏當雄溫

2、泉附近的土壤中。用錐蟲藍平板，55℃培養(yǎng)，經(jīng)過多次篩選得到。經(jīng)生理生化初步鑒定后，克隆16srDNA基因測序，提交GeneBank比對后，鑒定為地衣芽孢桿菌(Bacillus licheninforrnisI)，命名為B.licheninformisLT。 本次實驗中均采用分光光度法，建立酶濃度與反應時間的關(guān)系從而測定酶活力。 通過對B.lichenformis LT的生長條件和產(chǎn)酶條件的研究表明：LB培養(yǎng)基中可以在pH

3、3.0～11.0，20℃～ 65℃的條件下生長，添加一定量淀粉具有刺激產(chǎn)酶之作用，產(chǎn)酶最適溫度50℃，最佳產(chǎn)酶pH 10.0，發(fā)酵液單位酶活可達65 U。經(jīng)優(yōu)化培養(yǎng)基(g/100 mL)(黃豆粉1.5，玉米粉1.5，NaCl 1，K<,2>HPO<,4> 0.01，KH<,2>PO<,4>0.01，CaCl<,2> 0.4，司盤40 0.1，pH 10.0)在50℃、裝液量10％、180 r/min的搖床培養(yǎng)72 h后，測得酶活105

4、U。優(yōu)化條件下350 mL發(fā)酵液通過硫酸銨、酒精相繼沉淀，離心收集沉淀物，冷凍干燥后可以得到淡黃色有刺激性氣味的固體酶粉約3.5 g左右。通過對酶性質(zhì)的研究可得知：酶的最適反應溫度為95℃，最適酶作用pH10．0，適量濃度Ca<'2+>在60℃～80℃的范圍對酶活力有激活作用，在80℃以上對酶活力有抑制作用，過高濃度的Ca<'2+>對酶活力有抑制作用。Mg<'2+>在60℃～90℃的范圍對酶活力有激活作用，在90℃以上對酶活力有抑制作用

5、。甘氨酸、Li<'+>、Fe<'2+>、Sn<'2+>等對酶有激活作用，磷酸銨、磷酸氫二鉀、Ba<'2+>對酶活力影響不大，Cu<'2+>、Ve<'2+>、Zn<'2+>、Bi<'3+>、A1<'3+>、乙二胺四乙酸鈉使酶失去活性。本文還研究了該酶反應的動力學特征，通過測定不同底物濃度下的酶活力可得知：該酶反應屬于底物抑制型。 最后介紹了該酶在紡織退漿工業(yè)的應用。討論了酶濃度、溫度、pH值、金屬離子濃度及處理時間等對退漿率的影響