滲透脅迫相關(guān)基因?qū)煵莸倪z傳轉(zhuǎn)化及基因功能的研究.pdf

1、目前，抗逆反應(yīng)中的調(diào)控基因已逐漸成為研究熱點(diǎn)，如果能將調(diào)控基因?qū)胫参铮瑢⒂型罐D(zhuǎn)基因植物抗逆性狀獲得綜合改良，而進(jìn)行調(diào)控基因的克隆和功能鑒定，并從中篩選出能顯著提高植物抗逆性的基因是培育抗逆農(nóng)作物新品種(系)的重要前提條件，也是植物抗?jié)B透脅迫基因工程研究的關(guān)鍵?！　”狙芯繕?gòu)建了分別由E12強(qiáng)組成型啟動(dòng)子和rd29A滲透脅迫誘導(dǎo)型啟動(dòng)子調(diào)控的OsMAPK4和OsCDPK7基因的植物表達(dá)載體，并優(yōu)化了煙草遺傳轉(zhuǎn)化體系；利用農(nóng)桿菌介導(dǎo)法將

2、DREB2A、OsCDPK7和OsMAPK4基因?qū)霟煵?，獲得了轉(zhuǎn)基因植株。通過(guò)對(duì)T1代的抗逆性檢測(cè)，分析各基因的抗?jié)B透脅迫功能，探討這些調(diào)節(jié)基因在植物抗逆基因工程方面的應(yīng)用前景，為利用這些調(diào)節(jié)基因進(jìn)行抗逆基因工程研究奠定基礎(chǔ)。主要研究結(jié)果如下： 1.植物表達(dá)載體構(gòu)建　　構(gòu)建了4個(gè)植物表達(dá)載體，分別命名為pBM29A、pBME12、pBC729A和pBC7E12。其中pBM29A用于OsMAPK4基因在雙子葉植物中的滲透脅迫誘導(dǎo)型

3、表達(dá)，pBME12用于OsMAPK4基因在雙子葉植物中的組成型表達(dá)，pBC729A用于OsCDPK7基因在雙子葉植物中的滲透脅迫誘導(dǎo)型表達(dá)，pBC7E12用于OsCDPK7基因在雙子葉植物中的組成型表達(dá)。 2.遺傳轉(zhuǎn)化體系優(yōu)化　　(1)確定了不定芽分化階段Km的篩選壓力為20mg/L。　　(2)確定了最佳除菌劑為阿莫西林：克拉維酸鉀(2：1)，其使用濃度為100mg/L。 3.遺傳轉(zhuǎn)化 利用農(nóng)桿菌介導(dǎo)法將分別由

4、E12啟動(dòng)子和rd29A啟動(dòng)子調(diào)控的DREB2A基因、OsMAPK4基因和OsCDPK7基因?qū)煵荨褒埥?11”進(jìn)行遺傳轉(zhuǎn)化，獲得了大量的抗性苗。 4.抗性苗PCR檢測(cè)　　 獲得了轉(zhuǎn)化pB2A29A質(zhì)粒的PCR陽(yáng)性植株66株，轉(zhuǎn)化pB2AE12質(zhì)粒的PCR陽(yáng)性植株17株，轉(zhuǎn)化pBM29A質(zhì)粒的PCR陽(yáng)性植株13株，轉(zhuǎn)化pBME12質(zhì)粒的PCR陽(yáng)性植株45株，轉(zhuǎn)化pBC729A質(zhì)粒的PCR陽(yáng)性植株11株，轉(zhuǎn)化pBC7E12質(zhì)粒的P