一個光合組織特異表達(dá)啟動子的克隆、功能分析及其轉(zhuǎn)錄因子的鑒定.pdf

1、 本研究為了分離具有自主產(chǎn)權(quán)的葉片特異啟動子，采用接頭PCR的方法克隆了長度為1415bp的PNZIP啟動子并將其與GUS基因融合，然后對PNZIP啟動子進(jìn)行了組織表達(dá)分析、5’端缺失分析、3’端缺失分析，同時利用酵母單雜交的技術(shù)分離了一個可以和該啟動子結(jié)合的轉(zhuǎn)錄因子，并對該轉(zhuǎn)錄因子進(jìn)行了表達(dá)分析以及體內(nèi)、體外功能分析，研究發(fā)現(xiàn)： PNZIP啟動子是一個光合組織特異表達(dá)啟動子，它主要驅(qū)動GUS基因在葉肉的柵欄組織和海綿組織中表達(dá)，而

2、在根、花、萼片和子房中不表達(dá)；在PNZIP啟動子中G-box和GATACT元件單獨(dú)并不能賦予啟動子葉片特異表達(dá)的特性，只有兩者相互作用才能決定啟動子的特異表達(dá)，而PNZIP啟動子中的Box-Ⅱ和類AT-1元件作為正調(diào)控元件可以增強(qiáng)報告基因的表達(dá)活性；電泳遷移變動分析實驗證明GAAATA元件可以和煙草核蛋白抽提物特異的結(jié)合，Northern雜交表達(dá)分析表明NtbZIP基因在煙草的根、莖、葉中均有表達(dá)，為進(jìn)一步的研究NtbZIP基因功能奠定