2023年全國(guó)碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
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1、端粒存在于真核細(xì)胞線性染色體末端,由核酸和蛋白構(gòu)成,核酸部分由富含鳥嘌呤的重復(fù)序列串聯(lián)而成,整體上像一個(gè)帽子結(jié)構(gòu),對(duì)穩(wěn)定染色體發(fā)揮作用。作為非編碼序列,細(xì)胞分裂一次端粒就會(huì)丟失一部分的序列直到縮短到臨界值,此時(shí)細(xì)胞不再進(jìn)行分裂,轉(zhuǎn)而走向衰老和死亡。端粒酶是一種特殊的酶,具有反轉(zhuǎn)錄特性。其中端粒酶催化亞基和端粒酶RNA組分被認(rèn)為是端粒酶行使催化功能的最小單位。我們知道植物的端粒酶RNA模板基因的序列組成直接決定了延伸到端粒末端序列的堿基順

2、序,因此只要對(duì)該序列進(jìn)行改變必然會(huì)導(dǎo)致連接到染色體末端序列的變化。
   本論文中構(gòu)建了兩個(gè)含有玉米端粒酶RNA的pCAMBIA1301穿梭質(zhì)粒,一個(gè)攜帶模板區(qū)正常的玉米端粒酶RNA候選序列(野生型),另一個(gè)攜帶模板區(qū)定點(diǎn)突變處理的端粒酶RNA候選序列(突變型),采用pCAMBIA1301穿梭質(zhì)粒和LBA4404菌株組成的雙元載體,侵染不同品種玉米成熟胚誘導(dǎo)的愈傷組織,目的是鑒定玉米端粒酶RNA模板基因候選序列。玉米端粒是位于玉

3、米染色體末端串聯(lián)重復(fù)的5'-TTTAGGG-3'序列,在實(shí)驗(yàn)中構(gòu)建兩個(gè)鑒定體系,一個(gè)是玉米端粒酶RNA模板基因候選序列轉(zhuǎn)基因體系,另一個(gè)是對(duì)候選序列進(jìn)行了定點(diǎn)突變的轉(zhuǎn)基因體系。采用基因組DNA端粒末端擴(kuò)增方法和端粒酶活性檢測(cè)法共兩種方法分別對(duì)轉(zhuǎn)基因玉米愈傷組織進(jìn)行了鑒定和分析。如果該候選序列為正確的序列,用基因組DNA端粒末端擴(kuò)增方法時(shí),由于實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)制備的T0/T3T接頭進(jìn)行了單堿基改變,與正常組和野生組端粒末端序列相差一個(gè)堿基,而與突

4、變組端粒末端序列完全匹配,所以能夠更好與突變組端粒連接。同時(shí),用端粒酶活性檢測(cè)法時(shí),在端粒酶活性檢測(cè)體系中不提供dATP和dCTP,只有突變組的端粒酶才能更好地延伸。
   研究結(jié)果表明:培養(yǎng)的愈傷組織中,甜玉米的愈傷誘導(dǎo)率在40%左右,而糯玉米的誘導(dǎo)率高達(dá)80%;在抗性篩選培養(yǎng)基上已成功獲得抗性愈傷組織,經(jīng)PCR鑒定愈傷組織基因組中分別含有野生和突變的目的片段;對(duì)正常組、野生組、突變組進(jìn)行基因組DNA端粒鑒定,當(dāng)退火溫度較低時(shí)

5、,正常組和野生組可通過端粒的滑動(dòng)作用進(jìn)行擴(kuò)增,導(dǎo)致泳道內(nèi)也有條帶,適當(dāng)提高退火溫度實(shí)現(xiàn)了前兩組對(duì)應(yīng)的泳道出現(xiàn)少量條帶,而突變組泳道出現(xiàn)較亮條帶,突變組DNA末端特異引物擴(kuò)增出的DNA產(chǎn)量明顯高于正常組和野生組;對(duì)正常組、野生組、突變組進(jìn)行端粒酶活性測(cè)定,結(jié)果顯示在剔除dATP后雖然正常組和野生組也表現(xiàn)出一定端粒酶活性,但突變組的端粒酶活性明顯高于其它兩組。兩種鑒定方法的結(jié)果都與預(yù)期的一致,說明了對(duì)端粒酶RNA模板基因候選序列所進(jìn)行的堿基

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