抑瘤素M在大鼠非酒精性脂肪肝病中表達(dá)的意義.pdf

1、目的:本實驗通過測定抑瘤素M(oncostatin M，OSM)對大鼠肝星狀細(xì)胞株T6(hepatic stellate cell line T6，HSC-T6)的活化及增殖的影響，以及抑瘤素MⅡ型受體(oncostatin M receptorβ，OSMRβ)在膽堿缺乏氨基酸(cho-line-deficient-L-amino acid-defined，CDAA)飼料誘導(dǎo)的大鼠非酒精性脂肪肝病(non-alcoholicfatty

2、liver disease，NAFLD)模型肝臟中的表達(dá)，探討NAFLD發(fā)病的可能機制。
　　方法:體外實驗采用HSC-T6細(xì)胞，HSC-T6細(xì)胞培養(yǎng)1天、4天、7天后提取蛋白質(zhì)用Western blotting測定α-平滑肌激動蛋白(α-smooth muscle actin，α-SMA)和OSMRβ的表達(dá)。在96板孔中加入3×103個/孔 HSC-T6細(xì)胞適應(yīng)性培養(yǎng)4小時后，分別加入0、5、10、20ng/ml的大鼠OSM培養(yǎng)

3、24小時和48小時，再添加10μl Cell Counting Kit-8(CCK-8)試劑2個小時后在450nm波長測光密度(OD)值。體內(nèi)實驗選取6周齡，體重160g±20g的SD雄性大鼠30只。適應(yīng)性喂養(yǎng)7天后，隨機平均分為正常對照組和模型組。正常組給予普通飼料;模型組給予CDAA飼料，實驗周期為12周。實驗結(jié)束時，乙醚麻醉并處死大鼠后取其肝右葉，用于制作病理標(biāo)本及目的蛋白檢測。用免疫組化法檢測肝組織切片中α-SMA的表達(dá)情況。用

4、Western blotting法測定肝臟OSMRβ的表達(dá)。
　　結(jié)果:
　　1.HSC-T6細(xì)胞培養(yǎng)1天、4天和7天，隨著培養(yǎng)時間的延長，HSC-T6細(xì)胞表達(dá)α-SMA和OSMRβ水平逐漸升高(P＜0.05)。
　　2.添加OSM可促進(jìn)HSC-T6細(xì)胞增殖（P＜0.05），其促進(jìn)作用呈劑量和時間依賴性。
　　3.CDAA組肝臟的α-SMA水平較正常對照組升高(n=15，P＜0.05)，同時CDAA組肝臟表達(dá)OS