常染色體顯性多囊腎病患者尿蛋白譜與疾病進(jìn)展的相關(guān)性研究.pdf

1、研究目的:檢測常染色體顯性多囊腎病(ADPKD)患者的尿液蛋白譜，探究反映腎單位各節(jié)段損傷、腎臟局部炎癥和補(bǔ)體系統(tǒng)活性的尿蛋白指標(biāo)在ADPKD疾病進(jìn)程中的變化規(guī)律，同時(shí)聯(lián)合腎臟的功能指標(biāo)和結(jié)構(gòu)指標(biāo)以及PKD基因檢測結(jié)果，全面地評估ADPKD的疾病進(jìn)展，篩選具有臨床指導(dǎo)意義的尿液標(biāo)志物。
　　研究方法:第一部分研究是一個(gè)由8家單位參與的、觀察性橫斷面研究，從2014年3月至2016年8月期間住院或門診隨訪的ADPKD患者中，按照CK

2、D1-5期和男女比例1∶1入組患者。采集病史，記錄實(shí)驗(yàn)室檢查結(jié)果，留取空腹清潔中段晨尿標(biāo)本和空腹血清標(biāo)本，應(yīng)用酶聯(lián)免疫吸附測定(ELISA)、散射比濁法、透射比濁法，同步檢測血、尿蛋白指標(biāo)的濃度。采用核磁共振成像技術(shù)(MRI)行雙側(cè)腎臟平掃并測算總腎體積(TKV)。根據(jù)CKD1組的多囊腎病患者一般特征，從健康體檢中心匹配正常人作為對照，男女比例1∶1。研究的尿蛋白共計(jì)十種，所有尿蛋白均以尿肌酐值進(jìn)行標(biāo)化。腎小球損傷指標(biāo):尿白蛋白/肌酐比

3、值(ACR)、尿轉(zhuǎn)鐵蛋白/肌酐(TRF/Cr)、尿免疫球蛋白G/肌酐(IgG/Cr)，近端腎小管損傷指標(biāo):尿腎臟損傷分子/肌酐(KIM-1/Cr)、尿肝臟型脂肪酸結(jié)合蛋白/肌酐(L-FABP/Cr)、尿中性粒細(xì)胞明膠酶相關(guān)脂質(zhì)運(yùn)載蛋白/肌酐(NGAL/Cr)、尿視黃醇結(jié)合蛋白/肌酐(RBP/Cr)、尿α1-微球蛋白/肌酐(α1-MG/Cr)，炎癥指標(biāo):尿單核細(xì)胞趨化蛋白-1(MCP-1/Cr)，補(bǔ)體指標(biāo):尿補(bǔ)體B因子(CFB/Cr)。<

4、br>　　第二部分和第三部分是單中心、前瞻性、縱向隊(duì)列研究，選擇2014年3月至2016年12月我科定期隨訪的ADPKD患者，基線時(shí)患者的估算腎小球?yàn)V過率eGFR≥15ml/min*1.73m2，以eGFR≥30ml/min*1.73m2為主。每隔半年或1年來院隨訪1次，隨訪內(nèi)容包括病史采集、體格檢查、一般實(shí)驗(yàn)室檢查、基于MRI的TKV測量、尿液蛋白譜檢測（指標(biāo)及其檢測方法同第一部分）。第三部分的PKD基因檢測采用的是高通量測序方法。<

5、br>　　結(jié)果:第一部分“常染色體顯性多囊腎病患者尿蛋白譜與疾病進(jìn)展的多中心橫斷面研究”:研究共納入200名ADPKD患者，根據(jù)CKD1期患者，匹配了40名健康人作為正常對照。腎小球損傷指標(biāo)尿ACR、尿IgG/Cr和尿TRF/Cr在疾病早期（CKD1期）就顯著高于正常人(P＜0.01)，尿ACR、尿IgG/Cr在ADPKD患者中，CKD1-2期內(nèi)整體的漲幅并不大，直到疾病后期（CKD3-5期）才會上升明顯(P＜0.05)，尿TRF/Cr

6、直到CKD4期才明顯上升(P＜0.001)。近端小管損傷指標(biāo)中，CKD1期患者同正常人相比，尿α1-MG/Cr和尿RBP/Cr無顯著差異，患者組間比較發(fā)現(xiàn)自CKD3期開始，二者尿液濃度開始顯著上升(P＜0.05);患者尿NGAL/Cr高于正常人(P＜0.05)，患者尿L-FABP/Cr在疾病早期與正常人無顯著差異(P＞0.05)，患者中至CKD4-5期，二者顯著上升，但是血清NGAL濃度變化則比較早，在CKD2期時(shí)就已明顯上升(P＜0.

7、05);CKD1期患者尿KIM-1/Cr顯著高于正常人，就ADPKD患者而言，隨著CKD的進(jìn)展，尿KIM-1/Cr逐漸增加，至CKD4期達(dá)最高，CKD5期似有回落的趨勢(P＞0.05)。補(bǔ)體指標(biāo):CKD1患者的尿CFB/Cr與正常人無異(P＞0.05)，CKD1-3期內(nèi)，尿CFB/Cr差異不大，濃度均比較低，但是CKD4-5期患者尿CFB/Cr濃度明顯上升(P＜0.001)。炎癥指標(biāo):CKD1患者的尿MCP-1/Cr顯著高于正常人(P＜

8、0.05)，患者中隨著eGFR下降，尿MCP-1/Cr逐漸升高(P＜0.001)，血清MCP-1濃度并不隨著疾病進(jìn)展而變化(P＞0.05)。
　　所有尿蛋白指標(biāo)均與eGFR呈負(fù)相關(guān)關(guān)系(P＜0.001)。對于早期患者（eGFR≥60ml/min*1.73m2），尿MCP-1/Cr與HtTKV的相關(guān)性優(yōu)于其它尿蛋白(r=0.396，P＜0.001)。對CKD1-3期的患者，進(jìn)一步作多元回歸分析發(fā)現(xiàn)，尿ACR、α1-MG/Cr、MCP

9、-1/Cr與HtTKV是獨(dú)立相關(guān)的。
　　第二部分“常染色體顯性多囊腎病患者尿蛋白譜與疾病進(jìn)展的前瞻隊(duì)列研究”:該隊(duì)列共納入了106名ADPKD患者，中位隨訪時(shí)間2.0[1.7-2.2]年，大部分患者的腎功能儲備相對較好。隨訪過程中，ADPKD患者的TKV的平均年變化值為79.4[23.8-148.4]cm3，TKV的平均年變化率(ΔTKV％/year)為5.33％[2.48％-10.65％]，eGFR平均年變化值為-3.2±6.

10、6ml/min*1.73m2，eGFR平均年變化率為-4.2±8.7％。應(yīng)用ROC曲線分析發(fā)現(xiàn):除了尿MCP-1和尿CFB之外的所有尿蛋白對基線eGFR＜60ml/min*1.73m2均有診斷價(jià)值，以尿α1-MG/Cr的診斷效能最佳，尿L-FABP/Cr次之;基線尿MCP-1/Cr對ΔTKV％/year＞5％和ΔTKV％/year≥6％均有預(yù)測作用。經(jīng)多因素Logistic回歸分析，基線尿MCP-1/Cr是ΔTKV％/year＞5％和Δ

11、TKV％/year≥6％的獨(dú)立預(yù)測因子。
　　第三部分“常染色體顯性多囊腎病患者尿蛋白譜與基因突變類型的關(guān)系”:該隊(duì)列共納入93名患者，主要來自第二部分的縱向隊(duì)列，中位隨訪時(shí)間是2.0[1.8-2.2]年，PKD基因檢測的陽性率是78.5％，20例患者未檢測出致病突變位點(diǎn)，PKD2基因突變、PKD1基因非截短突變和PKD1基因截短突變的比例分別是12.9％、20.4％、45.2％。無ADPKD家族史的患者檢測陰性率略高于有家族史患

12、者(36.8％ vs17.6％，P=0.13)。PKD突變類型并不影響TKV的增長速率(P＞0.05)。PKD1截短突變組患者的尿MCP-1/Cr顯著高于PKD1基因非截短突變組(P＜0.05)。多元分析發(fā)現(xiàn):患者的年齡與eGFR呈負(fù)相關(guān)，男性性別、PKD1基因突變（尤其是PKD1截短突變）是eGFR下降的獨(dú)立危險(xiǎn)因子，在眾多尿蛋白指標(biāo)中，尿ACR、L-FABP/Cr、KIM-1/Cr與eGFR呈現(xiàn)獨(dú)立負(fù)相關(guān);以基線HtTKV為因變量，