基于PI3K-Akt信號轉(zhuǎn)導通路探討電針治療腦缺血再灌注損傷的作用機制.pdf

1、目的:通過研究電針刺激大鼠大腦中動脈局灶性腦缺血再灌注模型（MCAO模型），檢測PI3K/Akt信號轉(zhuǎn)導通路上關鍵信號分子的表達，探討電針刺激“曲池”“足三里”穴治療腦缺血再灌注損傷的抗凋亡機制。
　　 方法:選用96只SPF級健康雄性SD大鼠，隨機分為假手術組，模型組，電針組，每組各32只，采用改良Zea Longa法制作大鼠大腦中動脈局灶性腦缺血再灌注模型(MCAO模型)，電針組于腦缺血再灌注2h開始電針大鼠患側(cè)“曲池”“足

2、三里”穴，疏密波，30min。治療結束后，各組于腦缺血再灌注后24h行神經(jīng)行為學評分觀察神經(jīng)功能恢復情況，腹主動脈采集血標本，并處死動物，斷頭取腦組織，運用TTC染色法觀察腦梗死體積變化，TUNEL染色法檢測腦組織細胞凋亡，免疫印跡法(Western-blot)檢測腦組織中關鍵信號分子PI3K，Akt，p-Akt，Bcl-2，Bax的蛋白含量表達，逆轉(zhuǎn)錄PCR法檢測腦組織Bcl-2，Bax mRNA的表達水平，采用酶聯(lián)免疫吸附法(ELI

3、SA)檢測血清BDNF和GDNF的含量變化。
　　 結果:腦缺血再灌注2h，模型組與電針組大鼠神經(jīng)行為學評分無明顯差異(P＞0.05);腦缺血再灌注24h，電針組大鼠神經(jīng)行為學評分較模型組有顯著差異(P＜0.05);腦組織病理形態(tài)學觀察上，電針組大鼠較模型組相比，TTC染色法觀察腦組織中腦梗死體積明顯減少，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05);TUNEL染色觀察腦組織細胞凋亡中模型組大鼠TUNEL陽性細胞凋亡數(shù)較假手術組相比明顯增多

4、，而電針組的TUNEL陽性細胞凋亡數(shù)較模型組比則有明顯下降(P＜0.05)，差異有統(tǒng)計學意義;Western-blot及逆轉(zhuǎn)錄PCR法檢測腦組織缺血區(qū)發(fā)現(xiàn)電針能調(diào)節(jié)大鼠腦組織PI3K/Akt信號轉(zhuǎn)導通路的Akt的磷酸化水平，并同時上調(diào)其相關凋亡蛋白基因Bcl-2的含量表達，下調(diào)促凋亡基因Bax的含量水平，電針組較模型組差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05);進一步檢測PI3K活化因子BDNF及GDNF血清含量發(fā)現(xiàn)，與假手術組對比，模型組與電針