混合培養(yǎng)基模式培養(yǎng)雜交瘤細(xì)胞表達(dá)單克隆抗體.pdf

1、雜交瘤細(xì)胞表達(dá)的單抗具有特異性強(qiáng)、成分均一可控等優(yōu)勢(shì)，廣泛應(yīng)用于疾病治療、醫(yī)學(xué)診斷、生物免疫檢測(cè)和蛋白純化等領(lǐng)域。本課題采用混合培養(yǎng)基模式將雜交瘤細(xì)胞進(jìn)行減血清懸浮馴化培養(yǎng)，通過(guò)優(yōu)化基礎(chǔ)培養(yǎng)基，流加培養(yǎng)基，流加策略，接種密度和添加物來(lái)提高單克隆抗體的表達(dá)量，并進(jìn)行抗體的分離純化。
　　采用逐步減血清懸浮馴化的方法使雜交瘤細(xì)胞可以在2％低含量血清的條件下懸浮生長(zhǎng)，其中在OptiCHO培養(yǎng)基中達(dá)到了完全去血清馴化。考察了四種不同接種密

2、度，篩選出了最適宜雜交瘤細(xì)胞生長(zhǎng)表達(dá)的初始接種密度0.3×106cells/mL。采用不同商業(yè)培養(yǎng)基混合配比的方法篩選出RPM1640:SFM4CHO:OptiCHO在4.5:4.5:1混合配比的條件下，可得到最高的最終細(xì)胞抗體表達(dá)量相比于其他7中混合配比條件。通過(guò)對(duì)比5種不同的流加液，分析細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)和產(chǎn)物表達(dá)量，篩選出來(lái)流加液FD004作為雜交瘤細(xì)胞流加培養(yǎng)時(shí)的流加培養(yǎng)基?？疾炝骷优囵B(yǎng)基FD004的每次流加體積和流加次數(shù)，每?jī)商炝骷?/p>

3、一次，每次流加量為初始體積的3%時(shí)，雜交瘤細(xì)胞可得到最高的最終細(xì)胞抗體表達(dá)量168mg/L相比于其他兩種流加策略。通過(guò)搖瓶實(shí)驗(yàn)確定的雜交瘤細(xì)胞培養(yǎng)工藝血清濃度為2%胎牛血清、培養(yǎng)基配比為RPM1640:SFM4CHO:OptiCHO為4.5:4.5:1、接種密度為0.3×106cells/mL，采用批次補(bǔ)料流加培養(yǎng)，每?jī)商炝骷右淮?，每次流加量為初始體積的3%在5L攪拌式生物反應(yīng)器中進(jìn)行放大培養(yǎng)，得到了245mg/L的抗體表達(dá)量。