以Tie2為靶標(biāo)的抗腫瘤血管生成的研究.pdf

1、Tie2/TEK是胚胎血管發(fā)育和腫瘤血管形成都需要的內(nèi)皮細(xì)胞酪氨酸激酶受體,血管生成素Ang1(angiopoietin)是其配體,正常成人組織中,Ang1/Tie2受體水平較低,用于維持成熟的血管結(jié)構(gòu);一般癌組織中Ang1/Tie2的表達(dá)較為活躍.Ang1/Tie2在血管形成中具有重要調(diào)節(jié)作用;可溶性Tie2在體液中同配體Ang1結(jié)合,阻止血管內(nèi)皮細(xì)胞上的Tie2受體酪氨酸激酶的磷酸化,阻斷了Ang1/Tie2信號(hào)傳導(dǎo)系統(tǒng)的傳導(dǎo),使血

2、管不能生成,所以可溶性Tie2在治療腫瘤方面有一定的前景.從上面的論述我們知道:要想阻斷Ang1/Tie2系統(tǒng)的信息通路,有以下兩種方法:1.表達(dá)可溶性Tie2片段,用它去中和游離的Ang1;2.制備抗Tie2抗體,阻斷Ang1和Tie2受體結(jié)合.基于以上兩點(diǎn),我們作了如下工作:從胎盤(pán)組織中克隆出Tie2基因的膜外區(qū),將Tie2的前360個(gè)氨基酸同IgG的Fc融合,插入B7載體,并在CHO中表達(dá)可溶性Tie2片段,ELISA檢測(cè)出Tie

3、2蛋白.構(gòu)建一個(gè)半合成抗體庫(kù),不經(jīng)免疫制備人源抗Tie2 Fab抗體.通過(guò)RT-PCR方法,從人臍帶血淋巴細(xì)胞總RNA擴(kuò)增輕鏈基因及部分重鏈VH段基因,將輕鏈基因插入pCOMb3載體中,得人輕鏈質(zhì)粒庫(kù);從HBsAb的Fd段基因制備含有不同長(zhǎng)度隨機(jī)化CDR3的FR3-CDR3-J-CH1片段,然后將VH段基因與隨機(jī)化的CDR3融合,得到Fd基因片段,再將其插入輕鏈質(zhì)粒庫(kù)中,得半合成人Fab質(zhì)粒庫(kù).通過(guò)多次建庫(kù),獲得總?cè)萘繛?×10<'7>