用于有機相中催化反應(yīng)的脂肪酶固定化.pdf

1、該文首先綜述了目前手性化合物的研究成果,介紹了固定化酶的定義、制備方法、固定化對酶的活性影響及固定化酶的應(yīng)用情況.在實際應(yīng)用中,利用游離酶作為催化劑有很多的局限性,因此該文主要研究Lipase QL的固定化.Lipase QL能夠高選擇性地催化R-1-苯乙醇的轉(zhuǎn)酯化反應(yīng),因此以(R,S)-1-苯乙醇的拆分反應(yīng)作為模型反應(yīng),考查固定化酶的效果.乙酸乙烯酯作為酰基供體兼溶劑,在有機相中1-苯乙醇與乙酸乙烯酯在脂肪酶的催化下發(fā)生不可逆的轉(zhuǎn)酯化

2、反應(yīng).考察了固定化酶催化轉(zhuǎn)酯化反應(yīng)的條件,并與游離酶進行比較.選用40℃,150rpm進行反應(yīng),固定化酶在1—苯乙醇濃度為3.0mol/L左右出現(xiàn)底物抑制現(xiàn)象;考察了含相同蛋白量的固定化酶和游離酶催化轉(zhuǎn)酯化反應(yīng)的全過程,當(dāng)轉(zhuǎn)化率達到50％時,前者所用的時間比后者縮短了5倍.固定化沒有改變酶的底物選擇性,反應(yīng)中R—乙酸-1-苯乙醇酯的對映體選擇性在98％以上.考察了固定化酶的性質(zhì).固定化酶較游離酶有更好的熱穩(wěn)定性;將固定化酶用于催化轉(zhuǎn)酯化

3、反應(yīng)的全過程,重復(fù)使用10次,酶活還保留有75.5％,操作穩(wěn)定性較好;將固定化酶分別在4℃、30℃、40℃下放置56天,保留的活力分別是原來的70.4％、56％和45.7％,在4℃下貯存穩(wěn)定性較好.考察了另一種對R-1-苯乙醇具有高選擇性的酶LipaseAS的固定化情況.利用載體涂布法,硅藻土作載體,在緩沖液pH為8.5,濃度為0.05mol/1,載體:酶=13:1時得到的固定化酶具有較高的轉(zhuǎn)酯活力.對固定化酶的熱穩(wěn)定性、重復(fù)利用情況的

4、考查中,發(fā)現(xiàn)其在有機溶劑中失活嚴重.固定化酶的底物耐受能力較游離酶低.建立了固定化酶催化轉(zhuǎn)酯化拆分1—苯乙醇反應(yīng)的動力學(xué)模型.(公式略)根據(jù)實驗數(shù)據(jù),進行參數(shù)擬合,得到一組模型參數(shù)為:Kp=0.0003min<'-1>、K<,A>=0.9589mmol/L、K<,B>=0.0054mmol/L、K<,QA>=0.00002mmol/L、K<,BQA>=0.00001l mmol/L將不同濃度、不同酶量下的模型計算值與實驗值進行比較,二者