芍藥組織培養(yǎng)體系的研究.pdf

1、芍藥(Paeonia lactiflora Pall.)是我國著名觀賞花卉，其組織培養(yǎng)體系的建立對芍藥快繁和育種均具有重要意義。本研究以觀賞芍藥品種‘紫鳳羽’、‘蝶落粉池’、‘遍地紅’、‘大富貴’、及野生種川赤芍上采集的種子為試材，對打破種胚休眠和胚繼續(xù)發(fā)育進(jìn)行了系統(tǒng)研究;以‘粉盤藏珠’、‘奇花露霜’、‘丹鳳’、‘魯紅’鱗芽為試材，探討了消毒程序、褐化的抑制、鱗芽萌發(fā)、腋芽增殖、組培苗生根等，為芍藥優(yōu)良品種工廠化快繁提供了參考;以芍藥不

2、同無菌外植體進(jìn)行愈傷組織誘導(dǎo)以及愈傷組織增殖培養(yǎng)，對外植體的愈傷組織誘導(dǎo)能力以及最佳培養(yǎng)基進(jìn)行了探索研究。
　　 本研究通過種胚培養(yǎng)和鱗芽培養(yǎng)等構(gòu)建了芍藥的再生體系，還通過愈傷誘導(dǎo)獲得了愈傷組織途徑最佳外植體和培養(yǎng)基，有利于為芍藥的工廠化快繁生產(chǎn)提供技術(shù)基礎(chǔ)、為進(jìn)一步的基因工程改良提供基礎(chǔ)材料、為芍藥新品種的培育提供良好平臺。
　　 主要結(jié)果如下:
　　 (1)確定了不同外植體消毒程序
　　 外植體的適宜

3、消毒方式因種類而異:種胚以10％次氯酸鈉溶液處理15 min;鱗芽采用2％次氯酸鈉溶液處理10 min;無菌子葉和葉片、根等進(jìn)行愈傷組織誘導(dǎo)時，采用75％乙醇處理15 s。
　　 (2)探討了種胚萌發(fā)影響因素并篩選出種胚最佳萌發(fā)培養(yǎng)基
　　 種胚剝皮處理相對于保留種皮更加有利于種胚萌發(fā);光照條件下發(fā)芽率要高于暗培養(yǎng)，光照對芍藥種胚萌發(fā)有一定的促進(jìn)作用;不同芍藥品種的種胚萌發(fā)率存在差異性:所選4個品種的種胚萌發(fā)率以‘大富貴

4、’最高，‘遍地紅’次之，‘奇花露霜’和‘蝶落粉池’均較低。
　　 川赤芍上采集種子萌發(fā)率低于‘紫鳳羽’，但初期長勢優(yōu)于‘紫鳳羽’;川赤芍種胚最佳萌發(fā)培養(yǎng)基為:MS+GA31.0 mg·L-1+6-BA2.0 mg·L-1(NO.7);‘紫鳳羽’種胚最佳萌發(fā)培養(yǎng)基為:MS+GA32.0 mg·L-1+6-BA0.5 mg·L-1(NO.9);種胚生根最佳培養(yǎng)基為MS+GA30.2 mg·L-1(NO.15)。
　　 (3)

5、建立了高效鱗芽快繁體系
　　 ①初代培養(yǎng)中褐化問題的研究
　　 所采用的3種添加劑中，以PVP和AC對褐化的抑制作用較明顯，PVP含量為0.5 g·L-1時褐化率最低，為5.00％; AC對鱗芽萌發(fā)有一定的促進(jìn)作用;此外，將外植體材料在抗壞血酸溶液中切割、接種前用無菌水長時間浸泡以及前期采用暗培養(yǎng)等措施，能夠有效地降低褐化率。
　　 ②芽增殖體系的研究
　　 以‘粉玉奴’鱗芽進(jìn)行萌發(fā)誘導(dǎo)時，獲得理想萌發(fā)情

6、況;由于主側(cè)芽對激素反應(yīng)不同，偶見主芽和側(cè)芽不同時萌動現(xiàn)象，因此將主側(cè)芽分開培養(yǎng)。對‘粉盤藏珠’、‘奇花露霜’和‘丹鳳’的側(cè)芽進(jìn)行萌發(fā)誘導(dǎo)，并對‘魯紅’主芽進(jìn)行叢生芽誘導(dǎo);各品種側(cè)芽均獲得理想萌發(fā)率(100％)，‘魯紅’主芽在初代培養(yǎng)中即可在葉腋處獲得芽再生，增殖率最高為3.17。
　　 ‘粉玉奴’鱗芽（主側(cè)芽未分離）最佳萌發(fā)培養(yǎng)基為:1/2MS+GA31.0 mg·L-1+6-BA1.5mg·L-1NAA0.0 mg·L-1A

7、C1.0 g·L-1(NO.34);‘粉盤藏珠’側(cè)芽最佳萌發(fā)培養(yǎng)基:1/2MS+GA31.5mg·L-1+6-BA1.0 mg·L-1+AC1.0 g·L-1(NO.47);‘奇花露霜’側(cè)芽最佳萌發(fā)培養(yǎng)基為:1/2MS+GA31.5mg·L-1+6-BA0.5 mg·L-1+AC1.0 g·L-1(NO.46);‘丹鳳’側(cè)芽最佳萌發(fā)培養(yǎng)基為:1/2MS+GA31.5mg·L-1+6-BA1.5 mg·L-1AC1.0 g·L-1(NO.

8、48)?！敿t’最佳叢生芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基為:1/2MS+GA32.0mg·L-1+6-BA1.5 mg·L-1+AC1.0 g·L-1(NO.52)。
　　 ③生根方式和方法的研究
　　 對3月份已經(jīng)萌動的‘丹鳳’鱗芽進(jìn)行直接生根探索，所采用縱向劈裂法和速蘸法均未獲得生根;組培苗的生根較難，根數(shù)少而且沒有二級根，所獲得最佳生根培養(yǎng)基為1/2MS+IBA0.5mg·L-1(NO.53);‘粉盤藏珠’、‘奇花露霜’部分側(cè)芽在萌發(fā)

9、培養(yǎng)基上，暴露在空氣中的芽基都會有少根形成，推測無菌條件下芍藥生根可能需要透氣性好的培養(yǎng)條件。
　　 (4)獲得了不同外植體誘導(dǎo)的愈傷組織以及增殖問題的探索
　　 以莖段、葉片、子葉和根為外植體進(jìn)行愈傷組織的誘導(dǎo)，其中以葉片愈傷組織誘導(dǎo)率最高，子葉誘導(dǎo)的愈傷組織生長速度最快，莖段愈傷組織誘導(dǎo)率和活性均欠佳，根的培養(yǎng)并不能獲得愈傷組織的發(fā)生。葉片和子葉的最佳愈傷誘導(dǎo)培養(yǎng)基均為:MS+6-BA2.0 mg·L-1+NAA0.