抗廣譜性除草劑轉(zhuǎn)基因油菜創(chuàng)制及抗性評價(jià).pdf

1、油菜是我國最主要的油料作物之一。油菜生育期內(nèi)田間草害嚴(yán)重，且單子葉和雙子葉雜草混生，對除草劑的種類、用藥劑量和用藥時(shí)間均有嚴(yán)格要求，選擇性除草劑往往難以達(dá)到理想的除草效果。因此，培育抗廣譜性除草劑品種對提高油菜生產(chǎn)效益有重要價(jià)值。目前我國還沒有具有自主知識產(chǎn)權(quán)的廣譜非選擇性抗除草劑油菜品種。
　　本研究旨在利用農(nóng)桿菌介導(dǎo)的油菜下胚軸遺傳轉(zhuǎn)化方法，將新型抗草甘膦基因I.variabilis-EPSPS*和抗草銨膦基因RePAT*分別

2、轉(zhuǎn)入甘藍(lán)型油菜品系甲9707中，創(chuàng)制具有實(shí)用價(jià)值和自主知識產(chǎn)權(quán)的抗草甘膦和草銨膦轉(zhuǎn)基因油菜。主要研究結(jié)果如下:
　　(1)在轉(zhuǎn)I.variabilis-EPSPS*基因油菜植株獲得過程中在30mg/L草甘膦選擇壓條件下，共得到了130株再生植株，其中126株為陽性植株，以目標(biāo)基因?yàn)榘悬c(diǎn)的PCR檢測證明，再生植株的陽性率為97％。
　　(2)對轉(zhuǎn)I.variabilis-EPSPS*基因油菜T0代抗性處理結(jié)果表明，在用41％草

3、甘膦異丙胺鹽（農(nóng)達(dá)）商品制劑稀釋100倍后噴灑條件下仍能保持正常生長，對照完全死亡。
　　(3)通過Southern blot檢測，從96份轉(zhuǎn)I.variabilis-EPSPS*油菜T0代植株中鑒定到43份單拷貝插入轉(zhuǎn)基因材料。
　　(4)采用Tail-PCR和Inverse-PCR方法，對T0代43份單拷貝轉(zhuǎn)I.variabilis-EPSPS*基因材料進(jìn)行T-DNA側(cè)翼序列分析，共分離了31份材料的插入位點(diǎn)側(cè)翼序列。這

4、31份材料中共有14種具有不同插入位點(diǎn)的轉(zhuǎn)化事件。
　　(5)對7個(gè)T1代轉(zhuǎn)I.variabilis-EPSPS*基因油菜家系的抗性鑒定表明，這些材料在稀釋100倍的41％草甘膦異丙胺鹽（農(nóng)達(dá)）制劑噴灑條件下仍能正常生長，而對照在稀釋200倍處理下全部死亡。單拷貝轉(zhuǎn)基因家系處理后存活株與死亡株比例符合3∶1的單基因分離比。
　　(6)采用RT-PCR和Western blot方法，分別對部分T1代轉(zhuǎn)I.variabilis-

5、EPSPS*基因油菜家系的葉片組織進(jìn)行了基因表達(dá)和蛋白水平分析。所測轉(zhuǎn)基因植株中目的基因I.variabilis-EPSPS均有表達(dá)，但表達(dá)量在不同材料間有所差異。轉(zhuǎn)基因后代材料均可檢測到蛋白的表達(dá)，但不同材料之間蛋白表達(dá)水平存在明顯差異，蛋白質(zhì)水平和基因表達(dá)水平是一致的。
　　(7)比較了來自三個(gè)不同轉(zhuǎn)化事件的轉(zhuǎn)I.variabilis-EPSPS*材料和含有CP4-epsps基因材料的抗草甘膦表現(xiàn)。結(jié)果表明，含有不同抗性基因的