多角體蛋白融合的家蠶膜蛋白BmSCF表達(dá)和研究.pdf

1、膜蛋白由于其自身的一些特性,它的表達(dá)一直是科學(xué)界的一個(gè)難題。家蠶BmSCF(Bombyx moil stem cell factor apoptosis response protein)是一個(gè)尚未見(jiàn)報(bào)導(dǎo)研究過(guò)的基因,通過(guò)保守結(jié)構(gòu)域的分析推測(cè)它可能是SYS1家族的一員。這個(gè)家族的成員主要分布在胞內(nèi)的膜組織,在成熟高爾基體與胞內(nèi)其它內(nèi)含體之間的蛋白轉(zhuǎn)運(yùn)作用;同時(shí),在一些的研究報(bào)導(dǎo)中,該家族的一些蛋白作用于某些胞內(nèi)信號(hào)途徑,是一類(lèi)廣泛存在的

2、蛋白。
　　 本研究從家蠶組織cDNA中擴(kuò)增得到BmSCF基因的ORF序列,并構(gòu)建了融合有多角體基因的重組pET-32a(+)載體,在多角體與BmSCF之間引入了TEV蛋白酶切位點(diǎn)序列。在表達(dá)菌株Rossem內(nèi)IPTG誘導(dǎo)表達(dá)后,經(jīng)溶菌酶消化、離心和PBS洗滌即得到純度在50％以上的重組蛋白的粗提物,再通過(guò)M親和柱進(jìn)一步純化操作后得到純度較高的重組蛋白。通過(guò)Western Blotting檢測(cè),純化得到的蛋白即為目的融合蛋白。將

3、該蛋白進(jìn)行AcTEV酶切消化,SDS-PAGE結(jié)果顯示,相比陰性對(duì)照,酶切樣品多出兩個(gè)條帶,其大小分別對(duì)應(yīng)BmSCF和融合有pET-32a(+)載體標(biāo)簽的多角體蛋白的大小。然而穩(wěn)定性試驗(yàn)顯示,酶切下來(lái)的BmSCF蛋白很不穩(wěn)定,極易降解。通過(guò)熒光定量PCR實(shí)驗(yàn),我們檢測(cè)了BmSCF在五齡家蠶的多個(gè)組織中表達(dá)情況,結(jié)果顯示其在所檢測(cè)的各個(gè)組織中都有表達(dá),其中氣門(mén)、脂肪體和絲腺組織相對(duì)表達(dá)量較高,頭部、皮組織相對(duì)表達(dá)量較低。同時(shí),本研究嘗試性