可口革囊星蟲纖溶酶基因的表達(dá)及優(yōu)化.pdf

1、 學(xué)校代碼： 10385 分類號(hào)： 研究生學(xué)號(hào)： 1300203060 密 級(jí)： 可口革囊星蟲纖溶酶基因的表達(dá)及優(yōu)化 可口革囊星蟲纖溶酶基因的表達(dá)及優(yōu)化 Gene Expression and Optimization of Fibrinolyti

2、c Enzyme in Phasolosma esculenta 作者姓名： 溫春光 溫春光 指導(dǎo)教師： 許瑞安 許瑞安教授 教授 合作教師： 李少欽 李少欽教授 教授 學(xué) 科： 生物學(xué)（ 生物學(xué)（微生物 生物學(xué)） 研究方向： 基因工程與海洋藥物 基因工程與海洋藥物 所在學(xué)院： 生物醫(yī)學(xué)學(xué)院 生物醫(yī)學(xué)學(xué)院 論文提交日期：二

3、零一 二零一六年三月二十 二十八日 摘要 I 摘 要 血栓性疾病對(duì)人類生活的影響越來(lái)越大，嚴(yán)重危害著人類的健康，開發(fā)新型有效的溶栓試劑迫在眉睫。而纖溶酶是溶栓藥物的主要來(lái)源。關(guān)于溶栓藥物的開發(fā)已經(jīng)歷了四代， 各有其優(yōu)缺點(diǎn)。 海洋源纖溶酶的來(lái)源非常廣， 包括動(dòng)物、植物、 微生物均可見報(bào)道。 本實(shí)驗(yàn)室前期從海洋星蟲-可口革囊星蟲腸道中提取得到一種具有纖溶活性較強(qiáng)的酶， 并且測(cè)得其 N 端的氨基酸序列， 結(jié)合 5’RACE和 3’RACE

4、技術(shù)得到了兩條纖溶酶序列，分別命名為 PFE-1 和 PFE-2。本課題就是對(duì) PFE-2 進(jìn)行外源的表達(dá)。 成功構(gòu)建了原核表達(dá)載體 pET-22b(+)-PFE-2，乳糖誘導(dǎo)表達(dá)，但是重組蛋白無(wú)活性；隨后又構(gòu)建了帶組氨酸標(biāo)簽的表達(dá)載體 pET-22b(+)-PFE-2（his）和分子伴侶共表達(dá)，雖然相較于之前，重組蛋白的可溶性表達(dá)提高了，但是依舊無(wú)活性。 成功構(gòu)建構(gòu)建了真核表達(dá)載體 pPic9-PFE-2 和 pPic9-PFE-2(

5、his)，隨即電轉(zhuǎn)于 畢 赤 酵母 GS115 之 后 ， 篩選 出 了 兩株 工 程 菌 pPic9-PFE-2-GS115 和pPic9-PFE-2(his)-GS115，甲醇誘導(dǎo)表達(dá)，纖維平板實(shí)驗(yàn)結(jié)果出現(xiàn)了透明圈，說(shuō)明重組蛋白纖溶活性良好。所以采用真核表達(dá)系統(tǒng)要優(yōu)于原核表達(dá)系統(tǒng)。 研究結(jié)果說(shuō)明采用真核表達(dá)系統(tǒng)可以表達(dá)出有纖溶活性的重組纖溶酶，活性良好，這也拓寬了海洋源的纖溶酶庫(kù)，并且也尋找出了一條采用外源表達(dá)系統(tǒng)表達(dá) PFE-2