雙黃連粉針劑和口服液指紋圖譜的建立及其體外代謝初步探討.pdf

1、目的：建立注射用雙黃連粉針劑及口服液的指紋圖譜的高效液相色譜分析方法，分別對10批雙黃連粉針劑及口服液進(jìn)行相似性評(píng)價(jià)；考察三種不同溶媒溶解雙黃連粉針劑對其指紋圖譜的影響；通過建立體外代謝指紋圖譜，分別對雙黃連粉針劑及雙黃連口服液在大鼠肝微粒體體外代謝進(jìn)行初步探討。
　　 方法：利用Agilent1200高效液相色譜儀四元泵系統(tǒng)及紫外檢測器進(jìn)行梯度洗脫，選用C18 （150mm×4.6mm，5μm）色譜柱，通過考察多種不同流動(dòng)相系

2、統(tǒng)和梯度洗脫程序，最終確定甲醇(A)—0.25％冰醋酸(B)為流動(dòng)相系統(tǒng)，優(yōu)選的梯度洗脫程序?yàn)椋?～ 15 min，流動(dòng)相A為15％～ 35％；15～ 20min，A為35％；20～ 50min，A為35％～ 100％．流速1.0ml·min-1，檢測波長350nm，柱溫30℃，進(jìn)行梯度洗脫分離。分別將雙黃連粉針劑、雙黃連口服液、對照品用50％甲醇溶解或稀釋成一定濃度，進(jìn)樣20μl，檢測其60min的指紋圖譜；將溶于0.9％NaCl 注

3、射液和10％葡萄糖注射液的注射用雙黃連粉針劑及10個(gè)不同批號(hào)的注射用雙黃連粉針劑及雙黃連口服液用上述方法進(jìn)行指紋圖譜考察。制備大鼠肝微粒體，并測定其蛋白含量，孵化體系中蛋白含量為1mg·mL-1，分別對注射用雙黃連、雙黃連口服液、指標(biāo)成分對照品進(jìn)行孵化，在0min，10min，20min，30min，60min 取樣100μl，加入兩倍量冰冷甲醇終止反應(yīng)，在4000×g 離心10min后，取上清液作為樣品，按上述的色譜條件進(jìn)行體外代謝指

4、紋的建立。
　　 結(jié)果：得到雙黃連粉針劑、雙黃連口服液及其對照品的指紋圖譜，并對其質(zhì)量控制指標(biāo)成分進(jìn)行歸屬，以黃芩苷峰作為參照峰，對建立的高效液相色譜方法進(jìn)行精密度、重復(fù)性考察，同時(shí)對樣品的穩(wěn)定性進(jìn)行考察，結(jié)果主要共有峰相對保留時(shí)間和相對峰面積的RSD 均小于3％。通過對雙黃連粉針劑在三種溶媒中指紋圖譜相似性的評(píng)價(jià)，結(jié)果相似度大于0.97。分別對十批注射用雙黃連及雙黃連口服液進(jìn)行相似性評(píng)價(jià)，結(jié)果相似度均大于0.97。對雙黃連兩種

5、制劑代謝指紋圖譜的研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)主要有效成分黃芩苷在肝微粒體中發(fā)生代謝轉(zhuǎn)化，并且得到不同于黃芩素的產(chǎn)物。
　　 結(jié)論：建立的注射用雙黃連及雙黃連口服液的高效液相色譜分析方法具有良好的重現(xiàn)性，專屬性，能客觀的反映雙黃連制劑中指標(biāo)成分。通過對雙黃連粉針劑在三種不同溶媒中指紋圖譜相似性研究發(fā)現(xiàn)，溶媒對其對粉針劑化學(xué)成分的影響在指紋圖譜無體現(xiàn)。應(yīng)用建立的方法用于考察雙黃連制劑的質(zhì)量穩(wěn)定性，同時(shí)也可對產(chǎn)品批次間的差異進(jìn)行評(píng)價(jià)。