青蒿琥酯對(duì)百草枯致大鼠肺損傷機(jī)制的干預(yù)性研究.pdf

1、目的：近來百草枯中毒的報(bào)道呈逐年增加的趨勢，中毒劑量小，無特效解毒藥，又無確切有效的治療措施，致使百草枯中毒死亡率高。中毒后主要突出的損害為肺損害，但具體機(jī)制尚未完全明確。本實(shí)驗(yàn)通過監(jiān)測青蒿琥酯干預(yù)下百草枯中毒(PQP)大鼠血清中細(xì)胞因子-腫瘤壞死因子α(tumor necrosis factorα，TNF-α)、轉(zhuǎn)化生長因子β1(transforming growth factorβ1，TGF-β1)水平動(dòng)態(tài)變化及肺組織病理學(xué)改變，來

2、研究百草枯中毒大鼠肺損傷的發(fā)生機(jī)制及演變過程，初步探討青蒿琥酯對(duì)PQP大鼠肺損傷的作用，為揭示百草枯致大鼠肺損傷機(jī)制、尋找理想治療藥物及靶點(diǎn)作出有益的嘗試。
　　 方法：將65只SD雄性大鼠隨機(jī)分為兩組，正常對(duì)照組A(20只)和染毒組B(45只)。染毒組包括：青蒿琥酯治療組Z(22只)及非青蒿琥酯治療組P(23只)。B組45只大鼠禁食12小時(shí)后，一次性予百草枯PQ50mg/Kg稀釋至1ml灌胃染毒[1]。A組20只大鼠給予1ml

3、的生理鹽水灌胃。染毒成功后，Z組將配制好的青蒿琥酯溶液按10mg/100g/d取藥予染毒大鼠腹腔注射，A組與P組大鼠予等體積生理鹽水腹腔注射。分別于染毒后第12、24、48及72小時(shí)這4個(gè)時(shí)點(diǎn)，分別從三組中隨機(jī)取出5只大鼠。一方面，將不同時(shí)間點(diǎn)隨機(jī)取出的大鼠在用乙醚吸入性麻醉后剖腹，于腹主動(dòng)脈采血5ml，離心，取上清液，采用酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)檢測不同時(shí)間點(diǎn)三組大鼠血清中TNF-α和TGF-β1的水平，并于450nm處得到其OD

4、值。采用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)式樣結(jié)果分析，比較兩組間及組內(nèi)大鼠不同時(shí)間點(diǎn)血清中TNF-α及TGF-β1的動(dòng)態(tài)變化。所有結(jié)果以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，組間采用方差分析，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。另一方面，將采血后的大鼠剖胸，先肉眼觀察肺組織整體變化情況，再于大鼠左上肺取小塊組織，浸泡于10％甲醛溶液中，最后將固定好的肺組織進(jìn)行石蠟包埋、病理切片、蘇木精-伊紅染色(HE)，最后于光鏡下觀察病理變化。
　　 結(jié)果：1．染毒大鼠在

5、不同時(shí)間表現(xiàn)出精神萎靡、少動(dòng)、煩躁、厭食、易激惹、或毛蓬松、呼吸急促困難等不同表現(xiàn)，與以往實(shí)驗(yàn)動(dòng)物表現(xiàn)大致相同[2]。2．染毒大鼠血清中細(xì)胞因子TNF-α、TGF-β1水平，隨時(shí)間延長而逐漸增加：①非青蒿琥酯治療組與正常對(duì)照組同一觀察時(shí)間點(diǎn)組間比較，差異存在統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)：非青蒿琥酯組大鼠血清中細(xì)胞因子TNF-α及TGF-β1自染毒后12小時(shí)起升高，隨后逐漸升高，于72小時(shí)達(dá)高峰。②青蒿琥酯組與正常對(duì)照組同一觀察時(shí)間點(diǎn)組間比

6、較，差異存在統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)：青蒿琥酯組大鼠血清中的細(xì)胞因子TNF-α及TGF-β1自染毒后12小時(shí)起發(fā)現(xiàn)明顯升高，隨后逐漸升高，于72小時(shí)達(dá)高峰。③青蒿琥酯治療組與非青蒿琥酯組同一觀察時(shí)間點(diǎn)組間比較：青蒿琥酯治療組大鼠血清中細(xì)胞因子TNF-α及TGF-β1的水平在染毒后12小時(shí)至72小時(shí)之間均低于非青蒿琥酯組，但在48小時(shí)以及72小時(shí)時(shí)間點(diǎn)的差異性有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。3．①實(shí)驗(yàn)大鼠肺組織肉眼觀：正常對(duì)照組大鼠多數(shù)呈

7、粉紅色，色澤光亮，質(zhì)地柔軟；非青蒿琥酯組大鼠肺組織為暗紅色，腫脹較明顯，且邊緣變鈍，部分肺組織可見清晰的大片淤血；青蒿琥酯治療組也可見大鼠肺組織腫脹，及明顯的肺淤血跡象，但大鼠肺組織色澤較非青蒿琥酯組略淺，且肺組織腫脹及淤血程度較非青蒿琥酯組輕。②光鏡下觀察肺組織病理切片HE染色可見：正常對(duì)照組大鼠肺組織結(jié)構(gòu)基本正常。染毒組肺組織于染毒后12小時(shí)出現(xiàn)肺泡毛細(xì)血管擴(kuò)張、充血，以及炎細(xì)胞浸潤；在24小時(shí)時(shí)出現(xiàn)肺泡毛細(xì)血管擴(kuò)張、充血，且中性粒

8、細(xì)胞浸潤交前明顯；在48小時(shí)時(shí)病理改變達(dá)高峰；72小時(shí)時(shí)略降低。青蒿琥酯治療組與非青蒿琥酯組有相類似的病理改變，但從染毒后24小時(shí)始，同一時(shí)間點(diǎn)對(duì)應(yīng)比較肺組織損傷程度，青蒿琥酯治療組有所減輕，但差異不特別明顯。
　　 結(jié)論：①百草枯致肺損傷的SD雄性大鼠血清中，細(xì)胞因子TGF-β1及TNF-α水平均出現(xiàn)增高。在染毒后12小時(shí)發(fā)現(xiàn)血清中這兩種細(xì)胞因子水平明顯升高，72小時(shí)時(shí)可達(dá)高峰。這表明細(xì)胞因子TGF-β1及TNF-α參與了百草