AngⅡ-P38MAPK信號(hào)通路在大鼠非甾體類抗炎藥相關(guān)小腸損傷中的作用.pdf

1、目的：本研究用雙氯芬酸短期灌胃建立大鼠非甾體類抗炎藥（NSAIDs）相關(guān)小腸損傷模型，通過檢測大鼠小腸組織中腎素血管緊張素Ⅱ（AngⅡ）、磷酸化p38絲裂原活化蛋白激酶（p-P38MAPK）及細(xì)胞間黏附分子-1（ICAM-1）的表達(dá)，探討AngⅡ-P38MAPK信號(hào)通路在大鼠NSAIDs相關(guān)小腸損傷中的作用及其對ICAM-1表達(dá)的調(diào)控，進(jìn)一步明確NSAIDs相關(guān)小腸損傷的機(jī)制。同時(shí)實(shí)驗(yàn)中給予吉法酯進(jìn)行干預(yù)，觀察其對小腸損傷是否具有防治作

2、用，以期為臨床防治NSAIDs相關(guān)小腸損傷提供新的思路和實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　方法：24只健康、雄性SD大鼠按隨機(jī)數(shù)字表法分為實(shí)驗(yàn)對照組，雙氯芬酸模型組和吉法酯干預(yù)組，每組8只。實(shí)驗(yàn)對照組予生理鹽水灌胃（1mL/100g，1次/d），雙氯芬酸模型組參照雙氯芬酸人類常規(guī)口服治療劑量（75mg/d）折算成大鼠灌胃所需劑量7.8mg-1kg-1d給大鼠灌胃（1mL/100g，1次/d）。吉法酯干預(yù)組在造模前1d，先給予吉法酯31.25 mg-

3、1kg-1d（1mL/100g，1次/d）灌胃，造模當(dāng)日起，每天先予吉法酯31.25 mg-1kg-1d灌胃（1mL/100g，1次/d），1h后，再予雙氯芬酸7.8mg-1kg-1d灌胃。連續(xù)造模5d后麻醉處死所有大鼠，觀察小腸損傷情況，并進(jìn)行大體及病理組織學(xué)評分；免疫組化及免疫印跡法（Western Blot）法檢測小腸組織中p-P38MAPK蛋白的表達(dá)；免疫組化法檢測小腸黏膜中AngⅡ和ICAM-1的表達(dá)，并進(jìn)行相關(guān)性分析。

4、>　　結(jié)果：應(yīng)用7.8mg-1kg-1d雙氯芬酸灌胃5d后，雙氯芬酸模型組大鼠小腸損傷明顯，小腸黏膜出現(xiàn)不同程度的充血水腫、糜爛及潰瘍形成，大體評分為（3.13±1.25分），較實(shí)驗(yàn)對照組（0.00±0.00分）顯著升高（P＜0.01），吉法酯干預(yù)組病變程度較模型組有所減輕，大體評分結(jié)果（1.13±1.36分）與模型組相比，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。鏡下可見雙氯芬酸模型組小腸組織出現(xiàn)不同程度的上皮結(jié)構(gòu)消失，小腸絨毛壞死脫落，黏膜

5、變薄，固有層充血水腫，伴大量炎癥細(xì)胞浸潤，并可見毛細(xì)血管充血及淋巴管明顯擴(kuò)張。小腸病理組織學(xué)Chiu氏評分結(jié)果，雙氯芬酸模型組（3.00±0.76分）顯著高于實(shí)驗(yàn)對照組（0.00±0.00分）（P＜0.01）。而經(jīng)吉法酯干預(yù)后，小腸黏膜損傷（1.75±0.71分）較模型組明顯減輕（P＜0.05）。
　　AngⅡ主要表達(dá)于小腸黏膜上皮細(xì)胞及血管內(nèi)皮細(xì)胞胞漿中，以上皮細(xì)胞的表達(dá)更為明顯。在雙氯芬酸模型組小腸黏膜中，AngⅡ的表達(dá)顯著強(qiáng)

6、于實(shí)驗(yàn)對照組（P＜0.01），而在吉法酯干預(yù)組的表達(dá)較模型組有所減弱（P＜0.05）；p-P38MAPK主要表達(dá)于小腸黏膜上皮細(xì)胞和黏膜固有層的炎癥細(xì)胞，細(xì)胞核與細(xì)胞漿均有表達(dá)，且在模型組中的表達(dá)最強(qiáng)，在實(shí)驗(yàn)對照組和吉法酯干預(yù)組表達(dá)很弱或基本不表達(dá)，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P均＜0.01），進(jìn)一步用Western Blot法檢測p-P38MAPK蛋白表達(dá)水平，實(shí)驗(yàn)對照組小腸組織僅檢測到微弱的p-P38MAPK蛋白表達(dá)，其相對表達(dá)量為0.34

7、±0.14，模型組小腸組織p-P38MAPK蛋白的相對表達(dá)量為1.73±0.35，顯著高于實(shí)驗(yàn)對照組（P＜0.01），吉法酯干預(yù)組小腸組織p-P38MAPK蛋白的相對表達(dá)量為0.87±0.10，較模型組顯著降低（P＜0.01）。ICAM-1主要表達(dá)于小腸黏膜的上皮細(xì)胞，黏膜固有層的炎癥細(xì)胞和腸組織的血管內(nèi)皮細(xì)胞胞漿內(nèi)，其中以在炎癥細(xì)胞的表達(dá)更為明顯，ICAM-1在實(shí)驗(yàn)對照組和吉法酯干預(yù)組中的表達(dá)很弱或基本不表達(dá)，在模型組顯著增強(qiáng)，差異有

8、統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01，P＜0.05）。
　　相關(guān)分析顯示，AngⅡ、p-P38MAPK及ICAM-1的表達(dá)均與小腸黏膜組織學(xué)損傷呈正相關(guān)（r值分別為0.719，0.746，0.790，P均＜0.01），AngⅡ與p-P38MAPK的表達(dá)，p-P38MAPK與ICAM-1的表達(dá)均呈正相關(guān)（r值分別為0.679，0.836，P均＜0.01）。
　　結(jié)論：7.8mg-1kg-1d雙氯芬酸短期內(nèi)給大鼠灌胃即可致大鼠小腸損傷。實(shí)驗(yàn)

9、發(fā)現(xiàn)，AngⅡ、p-P38MAPK和 ICAM-1在損傷的小腸黏膜中均有較高表達(dá)，且與腸黏膜損傷嚴(yán)重程度呈正相關(guān)，表明其參與了NSAIDs相關(guān)小腸損傷的發(fā)病過程。AngⅡ可能通過激活P38MAPK信號(hào)通路，上調(diào)ICAM-1的表達(dá)，介導(dǎo)了腸道炎癥反應(yīng)。這一結(jié)果提示AngⅡ-P38MAPK信號(hào)通路的激活可能是NSAIDs小腸損傷的發(fā)病機(jī)制之一。吉法酯對于NSAIDs相關(guān)小腸黏膜損傷具有一定的保護(hù)作用，可有效減輕腸黏膜損傷，其機(jī)制可能與抑制A