氯酚化合物降解菌株的篩選、酶學(xué)性質(zhì)及降解效果初步研究.pdf

1、用固體平皿抗性實驗、液體培養(yǎng)降解2-氯酚的方法,從21株白腐菌中初篩、復(fù)篩后一株可在較寬溫度范圍內(nèi)降解2-氯酚的菌株W-28(Coriolus versicolor).該菌株在降解2-氯酚的液體培養(yǎng)基中只檢測出漆酶酶活,并通過其粗酶液降解2-氯酚的實驗,可以得知2-氯酚的降解與漆酶酶活之間有很好的線形關(guān)系.漆酶是白腐菌W-28產(chǎn)生的唯一木素降解酶類,且該菌產(chǎn)漆酶能力強,有開發(fā)利用價值.我們通過實驗確定了該菌在液體培養(yǎng)條件下產(chǎn)漆酶的培養(yǎng)基

2、組分和培養(yǎng)條件,從而使單位培養(yǎng)液中酶活力有所提高.確定了葡萄糖和蛋白胨分別為W-28產(chǎn)漆酶的最適的碳源和氮源,并發(fā)現(xiàn)Cu<'2+>濃度對漆酶生產(chǎn)有很大的影響.兩水平部分因子實驗設(shè)計結(jié)果表明,在18g/L葡萄糖、7g/L蛋白胨、0.05g/L Cu<'2+>條件下,漆酶活力可達(dá)到6.58U/ml.對W-28產(chǎn)生的漆酶粗酶液通過超濾濃縮、分子篩和離子交換層析進行了純化.Native-PAGE結(jié)果顯示粗酶液中存在兩種漆酶組分.對其中量占優(yōu)勢的

3、lacA進行了純化.用SDS-PAGE確定了漆酶lacA的分子量大約為66.0kDa.等電聚焦電泳顯示該酶的等電點等于或小于3.5.80℃時酶瞬時反應(yīng)速率最高,60℃的半衰期為25min,最適pH值為4.0.該酶氧化2,6-二甲氧基苯酚(DMP)的Km為94.5μmol/L.lacA中含2-4個銅離子,糖含量約為35.9﹪.金屬離子對酶活有一定的影響,大多數(shù)金屬離子對酶活力有明顯的抑制作用,如Fe<'2+>、Fe<'3+>、Hg<'2+