TLR4信號通路在大鼠慢性應激心肌損傷中作用的研究.pdf

1、一、研究背景和目的
　　 應激為機體在各種內(nèi)外環(huán)境因素及社會、心理因素刺激時所出現(xiàn)的全身性非特異性適應反應。軍事應激是指軍人在完成軍事任務過程中對極端惡劣生存環(huán)境、精神超負荷緊張及超強度作業(yè)等在內(nèi)的多種因素反應過程，包括心理、生理上的變化。適度應激反應往往能活化思維、提高軍人的警覺性和作業(yè)效率，但當應激壓力導致軍人的認知、情緒和行為發(fā)生改變、嚴重降低作業(yè)效率時，則表現(xiàn)為軍事應激障礙。
　　 心臟是應激作用的主要靶器官之一

2、。研究發(fā)現(xiàn)多種心臟疾病的發(fā)生和發(fā)展與應激機制的激活密切相關，神經(jīng)體液因素特別是炎癥細胞因子的釋放是重要機制。Toll 樣受體是一種膜受體，在機體防感染免疫中起關鍵作用，能被機體“危險”信號如：應激、損傷、壞死等激活。在心臟中主要表達TLR4。TLR4 激活使得信號轉導到胞內(nèi)，在一系列酶的作用下，NF-κB 活化，轉入細胞核中誘導特定基因的表達，導致炎癥因子產(chǎn)生。
　　 TLR4/NF-κB通路在慢性應激心臟中的作用還不清楚。為搞

3、清上述問題，本課題建立了大鼠慢性應激模型，觀察慢性應激對心肌的影響，研究TLR4/NF-κB、IL-6、TNF-α等和心肌損傷的關系，希望探索TLR4/NF-κB在慢性應激心臟中的作用，為慢性應激致心肌損傷防治提供實驗依據(jù)。
　　 二、材料和方法：
　　 第一部分：軍事訓練應激對戰(zhàn)士心血管系統(tǒng)影響的觀察選取連隊健康男性戰(zhàn)士64人，年齡18-20歲，同時選取健康男戰(zhàn)士10名做對照。
　　 軍事訓練應激為3 公里越野

4、加5分鐘數(shù)學運算，軍事訓練前后檢測BP、HR、EKG和SCL-90量表，并于訓練后抽血查血常規(guī)、C-RP、心肌酶譜、ACTH、皮質(zhì)醇、TNF-α、IL-6。對照組只抽血，不參加軍事訓練。
　　 第二部分：大鼠慢性應激致心肌損傷及NAC防治作用研究選用雄性SD大鼠，6-7周齡，體重180-220g，動物隨機分為對照組和實驗組，實驗組又分為應激1d、1w、2w、3w、4w、NAC組，每組8只。實驗組采用每天束縛6h+強迫游泳15mi

5、n 應激模式，NAC組在應激同時每日給予NAC150mg/kg 灌胃，持續(xù)2周。實驗期間每3天稱1次體重，每天觀察大鼠行為變化。
　　 各組于試驗結束次日處死大鼠。處死前連續(xù)記錄5分鐘心率、EKG 變化，記錄血壓變化。分離血清，同時留取心尖部心肌標本做TLR4 mRNA、NF-κB、電鏡、病理和心肌勻漿等檢查。對照組不應激，和實驗組大鼠同時處死取材。
　　 心肌酶CK 測定采用ABC-ELISA 方法，LDH、AST 用

6、全自動生化分析儀自動檢測。
　　 HE 染色觀察病理形態(tài)變化，同時根據(jù)心肌出血、水腫和滲出情況對心肌損傷進行評分，透射電鏡觀察心肌超微結構變化。采用Tunel 法觀察心肌細胞凋亡情況，用免疫組化方法觀察心肌組織iNOS表達。
　　 第三部分：TLR4信號通路在慢性應激大鼠心肌表達和意義的研究實驗動物及分組同第二部分。用RT-PCR方法測定心肌TLR4mRNA表達，用EMSA方法測定心肌NF-κB活性，用ELISA方法測定

7、心肌勻漿TNF-α、IL-6含量，用免疫組化方法觀察心肌組織TNF-α、IL-6表達。
　　 統(tǒng)計方法
　　 所有數(shù)據(jù)均用平均數(shù)±標準差表示，樣本均數(shù)比較用t 檢驗，組間比較用單因素方差分析，P＜0.05 認為有統(tǒng)計意義。
　　 三、結論
　　 1、軍事訓練急性應激后戰(zhàn)士出現(xiàn)了心率增快、舒張壓升高等表現(xiàn)，C-RP 升高，部分戰(zhàn)士EKG 出現(xiàn)了竇性心動過速、頻發(fā)房性早搏、ST 段抬高等表現(xiàn)。說明軍事訓練后可

8、以出現(xiàn)心血管方面的改變。
　　 2、成功建立了大鼠“束縛+強迫游泳”慢性應激模型。應激大鼠皮質(zhì)酮含量從應激后2周開始升高，出現(xiàn)了明顯的焦慮、倦怠、反應低下、食欲減少、體重增長減慢等變化。
　　 3、慢性應激大鼠血漿心肌酶升高，心肌病理和超微結構出現(xiàn)了改變，心肌細胞凋亡增加，部分大鼠出現(xiàn)了室上性心動過速、室性早博、房顫等心律失常表現(xiàn)，表明慢性應激可導致大鼠心肌損傷。
　　 4、慢性應激大鼠心肌TLR4表達增高，NF