類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎患者血清生物標(biāo)志物的蛋白質(zhì)組學(xué)研究.pdf

1、目的:
　　 通過(guò)基質(zhì)輔助激光解析/電離飛行時(shí)間質(zhì)譜(MALDI-TOF-MS)和雙向電泳(2-DE)技術(shù)比較類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎(RA)患者、骨性關(guān)節(jié)炎(OA)患者以及健康體檢者的血清蛋白表達(dá)譜，篩選、分析差異蛋白，尋找RA的血清蛋白標(biāo)志物，為此病的發(fā)病機(jī)制提供線索，為早期診斷、尋找治療的靶標(biāo)提供依據(jù)。
　　 方法:
　　 將131例患者和健康體檢者血清標(biāo)本隨機(jī)地分為建模組（30例RA，20例OA及21名健康體檢者）和

2、試驗(yàn)組（30例RA，15例OA及15名健康體檢者）。采用弱陽(yáng)離子(WCX)納米磁性微球捕獲收集血清中的相關(guān)蛋白質(zhì)，所獲蛋白質(zhì)經(jīng)PBSⅡ-C蛋白質(zhì)芯片閱讀儀繪制蛋白指紋圖譜，這些圖譜經(jīng)Proteinchip和BiomarkerWizard分析之后，用BiomarkerPatternsSoftware進(jìn)行識(shí)別，最終篩選出RA的特異性蛋白標(biāo)志物，并優(yōu)化組合建立診斷模型。用建立的蛋白質(zhì)譜模型對(duì)試驗(yàn)組血清標(biāo)本進(jìn)行盲法預(yù)測(cè)，驗(yàn)證該模型。用2-DE技

3、術(shù)對(duì)10例RA患者和10名健康體檢者的血清蛋白質(zhì)進(jìn)行分離，電泳凝膠經(jīng)硝酸銀染色后，通過(guò)圖像掃描和初步分析篩選特異蛋白質(zhì)斑點(diǎn)，從中選取目的蛋白質(zhì)斑點(diǎn)，用MALDI-TOF-MS測(cè)定其膠內(nèi)酶解后的肽質(zhì)指紋圖譜。
　　 結(jié)果:
　　 (1)RA組和對(duì)照組之間的血清蛋白質(zhì)指紋圖譜分析
　　 用MALDI-TOF-MS技術(shù)結(jié)合WCX納米磁性微球，對(duì)建模組的30例RA患者和41例對(duì)照者（20例OA患者和21名健康體檢者）的血

4、清樣本進(jìn)行蛋白指紋圖譜分析，在質(zhì)荷比(m/z)為2000～20000內(nèi)共發(fā)現(xiàn)33個(gè)具有顯著性差異的蛋白峰。與對(duì)照組相比，RA患者血清中高表達(dá)的蛋白峰有13個(gè)，低表達(dá)的有20個(gè)。
　　 (2)RA患者血清蛋白標(biāo)志物的篩選及診斷模型的建立
　　 在33個(gè)差異蛋白峰中篩選出5個(gè)診斷RA的最佳血清蛋白標(biāo)志物(m/z分別為15715.5、7771.4、8959.4、8469.8和8710.8)，并建立診斷模型，敏感性為93.3％，

5、特異性為95.1％。在試驗(yàn)組中進(jìn)行雙盲實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證，該模型對(duì)RA診斷的敏感性為86.7％，特異性為90％。
　　 (3)RA患者與健康體檢者的血清差異蛋白斑點(diǎn)的獲取及鑒定
　　 在實(shí)驗(yàn)對(duì)象的血清2-DE圖譜中約檢測(cè)到278個(gè)蛋白質(zhì)斑點(diǎn)，經(jīng)掃描分析發(fā)現(xiàn)有15個(gè)蛋白質(zhì)斑點(diǎn)在RA患者與健康體檢者的血清之間有顯著差異表達(dá)，從中選取清晰的、表達(dá)水平改變明顯的8個(gè)蛋白質(zhì)斑點(diǎn)進(jìn)行膠內(nèi)原位酶解，這8個(gè)蛋白質(zhì)經(jīng)質(zhì)譜分析全部鑒定出來(lái)。
　

6、　 結(jié)論:
　　 通過(guò)MALDI-TOF-MS結(jié)合WCX納米磁性微球技術(shù)成功地構(gòu)建了RA診斷模型，該模型由m/z分別為15715.5、7771.4、8959.4、8469.8和8710.8的5個(gè)蛋白質(zhì)組成，盲法檢測(cè)進(jìn)一步證實(shí)該模型臨床診斷的高靈敏度和高特異性。這些蛋白可能參與RA的發(fā)病機(jī)制，對(duì)RA的早期診斷、早期治療等方面具有一定的價(jià)值。
　　 采用2-DE聯(lián)合質(zhì)譜分析技術(shù)成功地篩選出8個(gè)RA相關(guān)蛋白，這些蛋白有望成為