靈芝多糖提取、分離純化、表征及體外抗氧化活性探究.pdf

1、靈芝（Ganoderma lucidum）屬于擔(dān)子菌綱，多孔菌科，靈芝屬真菌，在中國(guó)及亞洲國(guó)家是一種十分受歡迎的藥用真菌。靈芝含有多種生物活性組分如靈芝多糖、三萜、甾醇類、多種蛋白質(zhì)、不飽和脂肪酸、維生素、礦質(zhì)元素等。靈芝多糖（GLP）是靈芝的主要生物活性組分，具有抗癌、免疫調(diào)節(jié)、抗菌、抗氧化等多種藥理作用。近來(lái)越來(lái)越多的靈芝多糖產(chǎn)品作為功能食品出現(xiàn)在市場(chǎng)上。人體代謝過(guò)程中會(huì)產(chǎn)生活性氧類物質(zhì)，可導(dǎo)致癌癥、冠心病、動(dòng)脈硬化等疾病，所以清除

2、活性氧類物質(zhì)對(duì)人體非常重要。GLP在清除活性氧方面可展現(xiàn)良好的抗氧化活性，可能作為一種潛在的天然抗氧化基礎(chǔ)原料。
　　目前關(guān)于靈芝多糖的研究較為分散，主要集中在靈芝多糖的某種提取方法或性質(zhì)表征相關(guān)研究，很少針對(duì)不同方法提取靈芝多糖進(jìn)行系統(tǒng)的研究。鑒于此，本論文對(duì)靈芝多糖進(jìn)行了深入的研究，涉及到不同方法提取靈芝多糖的條件優(yōu)化、靈芝多糖的分離純化、理化表征及體外抗氧化活性等方面，以期為靈芝多糖的進(jìn)一步研究提供參考。主要研究成果如下：<

3、br>　?、懦曒o助水提法（UAE）和傳統(tǒng)熱水浸提法（HWE）提取靈芝多糖條件的優(yōu)化研究
　　HWE提取靈芝多糖的最佳條件為：溫度95℃，時(shí)間6h，液料比55：1，此條件下靈芝多糖的得率為0.66％，即6.6mg/g。UAE提取靈芝多糖的最佳條件為：溫度80℃，時(shí)間40min，液料比50：1，此條件下靈芝多糖的得率為0.76%，即7.6mg/g。
　?、瞥曒o助酶提法（UAEE）和酶提法（EE）提取靈芝多糖條件的優(yōu)化研究

4、r>　　EE提取靈芝多糖的最佳條件為：pH值6.9，溫度52℃，時(shí)間86min，此條件下靈芝多糖的得率為1.32%，即13.2mg/g。UAEE提取靈芝多糖的最佳條件：pH值6.8，溫度54℃，時(shí)間40min以及液料比50：1。此條件下靈芝多糖的得率為3.09%，即30.9mg/g，與其提取率預(yù)測(cè)值為3.13%較一致。
　　⑶靈芝多糖分離純化研究
　　對(duì)UAE得到的靈芝粗多糖進(jìn)行分離和純化，通過(guò)Sevag法除蛋白，活性炭脫色

5、，得到精制多糖（GLPUAE）；GLPUAE經(jīng)過(guò)DEAE-52纖維素層析柱得到了五種多糖組分，分別是中性多糖F1和酸性多糖F2、F3、F4和F5。由于水洗脫組分F1含量最高，因此對(duì)該組分進(jìn)行收集；F1通過(guò)Sephadex G-100凝膠柱色譜，成功純化得到了單一組分的水洗精多糖（GLPUAE-1）。
　　⑷超聲輔助水提法和傳統(tǒng)熱水浸提法對(duì)靈芝多糖理化表征的影響
　　對(duì)GLPUAE和GLPHWE的初步表征進(jìn)行了比較研究。高效凝

6、膠滲透色譜（HPGPC）結(jié)果表明：GLPUAE和GLPHWE的分子量分布較廣，均有四種多糖組成，二者平均分子量分別為465.65KDa和703.45KDa；高效液相色譜（HPLC）結(jié)果顯示：GLPUAE和GLPHWE均是雜多糖，GLPUAE和GLPHWE含有相似的單糖組成，均含有Man、Rha、Glu、Gal和Ara，二者單糖的摩爾比分別為2.58:1.25:11.17:2.5:1和3.11:1.11:19.44:2.33:1；傅里葉變

7、換紅外光譜（FTIR）結(jié)果表明：GLPUAE和GLPHWE都有典型的多糖特征鍵；高碘酸氧化及剛果紅實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：GLPUAE和GLPHWE擁有相近的糖苷鍵結(jié)構(gòu)，但不含三股螺旋結(jié)構(gòu)。
　?、沙曒o助水提法和傳統(tǒng)熱水浸提法對(duì)靈芝多糖體外抗氧化活性的影響
　　分別采用DPPH自由基清除能力，還原力及清除羥基自由基方法對(duì)GLPUAE和GLPHWE的體外抗氧化活性進(jìn)行評(píng)估，結(jié)果顯示，GLPHWE展示了更強(qiáng)的DPPH自由基清除能力，還原