農(nóng)桿菌介導(dǎo)GmWRKY21基因轉(zhuǎn)化大豆的研究.pdf

1、大豆?fàn)I養(yǎng)豐富,蛋白與脂肪含量較高,是國(guó)際貿(mào)易中居于重要地位的經(jīng)濟(jì)作物。發(fā)展大豆產(chǎn)業(yè)對(duì)解決我國(guó)大豆緊缺、滿足國(guó)內(nèi)不斷增長(zhǎng)的大豆消費(fèi)需求具有十分重要的意義。傳統(tǒng)常規(guī)育種具有選擇效率低、育種周期長(zhǎng)等缺點(diǎn)。相比之下,植物轉(zhuǎn)基因技術(shù)以其在改善大豆品質(zhì)、增強(qiáng)耐逆性、提高產(chǎn)量等方面具有定向改良、簡(jiǎn)便高效、周期較短等優(yōu)勢(shì),為大豆育種技術(shù)的發(fā)展和提升開辟了新途徑。
　　 本項(xiàng)實(shí)驗(yàn)分別以子葉節(jié)、帶一片子葉的胚尖作為外植體,通過(guò)農(nóng)桿菌介導(dǎo)法將耐冷相關(guān)

2、轉(zhuǎn)錄因子基因GmWRKY21導(dǎo)入大豆,以期獲得耐冷性明顯提高的大豆新種質(zhì)。取得如下主要研究成果:
　　 1、利用子葉節(jié)受體系統(tǒng)進(jìn)行的大豆遺傳轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn),主要對(duì)18個(gè)大豆基因型進(jìn)行了篩選比較并測(cè)定了恢復(fù)培養(yǎng)階段GA3濃度對(duì)叢生芽誘導(dǎo)分化的影響。結(jié)果顯示,大豆叢生芽誘導(dǎo)率在不同基因型之間存在顯著性差異,較適于大豆組織培養(yǎng)體系的基因型主要包括‘浙春3號(hào)’、‘H0301’、‘油02-32’、‘吉小豆7號(hào)’、‘浙春2號(hào)’和‘A7601’等。

3、從這18個(gè)基因型中選取了誘導(dǎo)率有差異的5個(gè)基因型,通過(guò)凱氏定氮法分別測(cè)定其叢生芽中蛋白含量,發(fā)現(xiàn)叢生芽誘導(dǎo)率、叢生芽生長(zhǎng)情況與叢生芽中蛋白含量之間無(wú)顯著相關(guān)性。以叢生芽誘導(dǎo)率及生長(zhǎng)活力、重復(fù)穩(wěn)定性等方面均效果較好的基因型浙春3號(hào)作為受體材料,比較了不同濃度GA3培養(yǎng)基中外植體叢生芽誘導(dǎo)率的差異。結(jié)果顯示,當(dāng)GA3濃度為0.5mg／L時(shí),叢生芽誘導(dǎo)率最高,與其他濃度的誘導(dǎo)效率有顯著性差異,且叢生芽生長(zhǎng)活力也相對(duì)較高,而濃度過(guò)高或者過(guò)低時(shí)都

4、會(huì)使叢生芽誘導(dǎo)率及活力下降。
　　 2、利用農(nóng)桿菌介導(dǎo)的帶一片子葉的胚尖轉(zhuǎn)化法將耐低溫相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子基因GmWRKY21轉(zhuǎn)入‘浙春5號(hào)’和‘中黃13’兩個(gè)大豆品種中。轉(zhuǎn)基因植株經(jīng)目的基因的PCR檢測(cè)和轉(zhuǎn)化T-DNA區(qū)域構(gòu)建特異性的PCR檢測(cè)得以確認(rèn)。低溫耐逆實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,脅迫處理前和處理后,轉(zhuǎn)基因植株相對(duì)電導(dǎo)率均顯著低于對(duì)照植株；與相對(duì)電導(dǎo)率變化不同,低溫脅迫后轉(zhuǎn)基因株系中脯氨酸含量的變化沒(méi)有統(tǒng)一規(guī)律；轉(zhuǎn)基因植株較非轉(zhuǎn)基因?qū)φ毡憩F(xiàn)